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lflishan木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
western blot抗體選擇與操作
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| 如果一塊膠轉(zhuǎn)膜后需要用兩種抗體，可以同時(shí)加兩種抗體孵育嗎？具體怎么操作呢？實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有人做過(guò)，急求助。。。另外，如果一種抗體是兔源的，而actin是鼠源的，二抗只有抗兔的，能用嗎 |
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xiaoqi5992
銀蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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3樓2013-01-14 13:14:59
2樓2013-01-14 12:50:25
cicelyzh
鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
lflishan: 金幣+3, ★★★很有幫助 2013-01-14 22:20:19
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1. 如果兩個(gè)目標(biāo)蛋白在膠上的位置有明顯差別是可以的，如果你不在乎把一抗混合的話(huà)。如果同時(shí)做，注意兩個(gè)抗體的檢出限要差不多。如果一個(gè)抗體很弱一個(gè)很強(qiáng)的話(huà)，效果會(huì)很不好。我一般是孵育完一個(gè)一抗，洗膜后直接放另一個(gè)一抗孵育，這樣可以根據(jù)抗體的靈敏程度確定孵育時(shí)間的長(zhǎng)短。洗膜后加二抗，兩個(gè)一起檢測(cè)。 2. 肯定不行的。二抗是識(shí)別一抗的IgG, 抗兔的二抗只能識(shí)別兔的一抗。 |
4樓2013-01-14 15:33:18
lflishan
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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5樓2013-01-15 09:54:44
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