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nieyaru新蟲 (小有名氣)
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[求助]
western blot 背景深淺問(wèn)題,請(qǐng)大家指教下啊
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| 我做的FN,Smad3還有IGFBP7三種抗體,一起做的為啥背景有的深有的淺? |
專家顧問(wèn) (知名作家)
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專家經(jīng)驗(yàn): +218 |
| 一抗和二抗?jié)舛雀邥r(shí)顯色背景會(huì)深,而且過(guò)高的抗體濃度會(huì)引起非特異性背景條帶的出現(xiàn);封閉試劑的濃度時(shí)間和種類也會(huì)產(chǎn)生不同的背景;FN,Smad3還有IGFBP7三種抗體一起做的為啥背景有的深有的淺,與不同抗體御魔的結(jié)和力大小不同,抗體孵育后用同樣的試劑洗膜,與膜非特異性結(jié)合的不同抗體的殘留量不同,導(dǎo)致背景深淺不一。 |
新蟲 (小有名氣)
專家顧問(wèn) (知名作家)
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專家經(jīng)驗(yàn): +218 |
| 重復(fù)以后膜的條件本身也會(huì)發(fā)生變化,不一定能完全重復(fù)。我用質(zhì)譜方法檢測(cè)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,都是送學(xué)校檢測(cè)中心,可是同樣的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的實(shí)驗(yàn)操作,MS圖譜重復(fù)性就是很難。用質(zhì)譜方法能夠檢測(cè)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,參見(jiàn):K.M.Downard, Mass Spectrometry of Protein Interactions,Wily-Interscience,2007. |
鐵桿木蟲 (正式寫手)
新蟲 (正式寫手)
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