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nieyaru新蟲 (小有名氣)
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[求助]
western blot 背景深淺問題，請(qǐng)大家指教下啊
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| 我做的FN,Smad3還有IGFBP7三種抗體，一起做的為啥背景有的深有的淺？ |
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nieyaru
新蟲 (小有名氣)
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3樓2012-05-19 00:19:23
凌波麗
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【答案】應(yīng)助回帖
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| 一抗和二抗?jié)舛雀邥r(shí)顯色背景會(huì)深，而且過高的抗體濃度會(huì)引起非特異性背景條帶的出現(xiàn)；封閉試劑的濃度時(shí)間和種類也會(huì)產(chǎn)生不同的背景；FN,Smad3還有IGFBP7三種抗體一起做的為啥背景有的深有的淺，與不同抗體御魔的結(jié)和力大小不同，抗體孵育后用同樣的試劑洗膜，與膜非特異性結(jié)合的不同抗體的殘留量不同，導(dǎo)致背景深淺不一。 |
2樓2012-05-18 11:28:30
凌波麗
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【答案】應(yīng)助回帖
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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-05-20 09:06:53
nieyaru: 金幣+1, ★有幫助 2012-05-21 01:55:09
| 重復(fù)以后膜的條件本身也會(huì)發(fā)生變化，不一定能完全重復(fù)。我用質(zhì)譜方法檢測(cè)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，都是送學(xué)校檢測(cè)中心，可是同樣的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的實(shí)驗(yàn)操作，MS圖譜重復(fù)性就是很難。用質(zhì)譜方法能夠檢測(cè)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，參見：K.M.Downard, Mass Spectrometry of Protein Interactions,Wily-Interscience,2007. |
4樓2012-05-19 12:14:10
flownaway
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5樓2012-05-19 22:51:21
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