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alice鐵桿木蟲 (正式寫手)
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[求助]
哪位熟悉枯草桿菌表達系統(tǒng)前輩，來幫忙解決一下小妹的實驗��！做不完怎么過年�。。�！
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本人做一個大黃歐文菌來源的蔗糖異構酶的表達，這基因已經在大腸桿菌里表達過了，想在枯草桿菌里表達，用的PHY300的穿梭質粒做載體，加了P43的啟動子，構建時P43和目的基因之間加入一個酶切位點，現(xiàn)在轉化完成，質粒雙酶切驗證正確。但37度下表達兩天后仍測不到酶活，哪位前輩以前做過的，可不可以給指導下我的問題是出在哪了？是本身異源表達有問題，還是載體的問題，還是表達條件的問題？？？馬上要放假了，研究生最后一年，不想過年回來還糾結這些實驗啊 ……………… |
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
alice: 金幣+10, ★★★很有幫助, 謝謝��！不過我們對枯草的系統(tǒng)真的不了解，身邊的人沒有很豐富的經驗，文章里的信息也不多，您可不可以給提供個更多了解枯草的途徑呢？ 2013-01-17 22:01:54
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵應助 2013-01-23 16:05:11
感謝參與，應助指數(shù) +1
alice: 金幣+10, ★★★很有幫助, 謝謝��！不過我們對枯草的系統(tǒng)真的不了解，身邊的人沒有很豐富的經驗，文章里的信息也不多，您可不可以給提供個更多了解枯草的途徑呢？ 2013-01-17 22:01:54
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵應助 2013-01-23 16:05:11
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枯草桿菌分泌表達有兩種系統(tǒng)，Sec和Tat。nprB信號肽屬于Sec系統(tǒng)。Tat分泌系統(tǒng)近年來受到重視，具有一些Sec系統(tǒng)沒有的優(yōu)點。但是無論哪個系統(tǒng)，都不能保證你的目的產物一定能夠分泌成功。 遇到分泌失敗，首先要檢查序列是否正確，有沒有破壞閱讀框；然后就是換信號肽，Sec系統(tǒng)和Tat系統(tǒng)的信號肽都可以嘗試一下。 |
8樓2013-01-17 21:26:11
scienzyme
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9樓2013-01-17 21:36:18
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