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huangrui5036金蟲 (小有名氣)
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[求助]
里氏木霉在10L發(fā)酵罐發(fā)酵檢測不到酶活
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最近在做發(fā)酵罐的實驗，但發(fā)酵罐上做卻檢測不到酶活。我做的是里氏木霉產(chǎn)木聚糖酶，是一種絲狀真菌。培養(yǎng)基的配方已經(jīng)在搖瓶上優(yōu)化好，并且在搖瓶里的酶活已經(jīng)非�？捎^。在搖瓶里基本上發(fā)酵24h就能檢測到酶活，48h后酶活就已經(jīng)很明顯了，最大酶活出現(xiàn)在第5天左右。 但悲劇的是我按照搖瓶的配方放大到30L發(fā)酵罐上（裝液量10L）到現(xiàn)在已經(jīng)50多小時了卻幾乎檢測不到酶活，悲催的是這已經(jīng)是第二罐了，兩罐都是這樣一直檢測不到酶活，但菌體生長卻很豐富。 與搖瓶不同的是，在罐上做的時候我加入了消泡劑GPE（添加量5ml/L），不知道是不是消泡劑的影響呢？ 還有一個很重要的東西就是溶氧，在種子液接入罐中后幾小時后溶氧迅速下降至0.2%左右，然后一直維持這個數(shù)值，到現(xiàn)在已經(jīng)50多個小時，溶氧似乎有回升跡象（已經(jīng)到1.0%左右），我的通風(fēng)量是10L/min，是不是這個通風(fēng)量小了的緣故。 望各位做發(fā)酵的高手支招啊，小弟在線等，感激不盡��！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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| 看來是你控制條件不好，調(diào)節(jié)通氣和轉(zhuǎn)速，讓溶氧保持一定水平，不要生長太快或者太慢。還有你的消泡劑量怎么那么多啊，我們一般30L才加5ml，消泡劑對菌體生長是有毒性的。而且你發(fā)酵罐肯定比搖瓶培養(yǎng)量大了，可能得多培養(yǎng)會兒才會有酶活。要多試幾次，摸一下發(fā)酵罐的培養(yǎng)條件。 |
3樓2013-01-17 09:23:46
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【答案】應(yīng)助回帖
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| 溶氧都掉到0.2%的，肯定會嚴(yán)重影響產(chǎn)酶的，試著攪拌轉(zhuǎn)數(shù)提高吧，通氣量10L/min夠了。30L的發(fā)酵罐，對于霉菌，打到500rpm都沒問題的，而且較高數(shù)的攪拌，霉菌會形成菌球，可能會對產(chǎn)酶有幫助。另外，你從初始就要保證足夠的溶氧，幾十小時以后再調(diào)節(jié)估計沒什么效果，菌體在低溶氧狀態(tài)下，相關(guān)合成酶系可能發(fā)生不可逆的變化。 |
7樓2013-01-18 16:22:48
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