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porphybaby金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
為什么我的DNA 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳 跑成這個(gè)鬼樣？
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如圖所示。 最左邊是 一個(gè)突變的單鏈DNA序列 是呈單鏈結(jié)構(gòu)的 含27個(gè)堿基 第二個(gè)是 經(jīng)過(guò)退火的一個(gè)四鏈體DNA序列 呈G-四鏈體結(jié)構(gòu) 也含27個(gè)堿基 再往右邊走 它們都是加了我的藥物處理的DNA 可是會(huì)發(fā)現(xiàn) 根本就沒(méi)有條帶 跑都跑不出來(lái)？？這是怎么回事？ 所用的藥物濃度與DNA的比例倍數(shù)是1,2，3，4、、、8 在4度下 TBE緩沖液中 80V 電泳 2.5小時(shí) 然后銀染 的 結(jié)果 我想問(wèn)下 為啥 條帶都沒(méi)有了呢？？？？ DNA電泳圖.jpg |
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2樓2013-01-21 17:15:59
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porphybaby
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4樓2013-01-21 21:48:17
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5樓2013-01-21 21:48:50
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
小丹木木: 金幣+3, 專家考核, 辛苦 2013-01-23 16:01:40
小丹木木: 金幣+3, 專家考核, 辛苦 2013-01-23 16:01:40
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覺(jué)的你樣品提取的有問(wèn)題，或者確實(shí)藥物將DNA降解了，還有，從你泳道口的殘痕判斷，從你加藥開(kāi)始的幾個(gè)條帶就有問(wèn)題，加樣孔殘留過(guò)多，上下貫穿的黑條帶，排除電泳問(wèn)題的話，應(yīng)該是DNA不規(guī)則碎片，各種長(zhǎng)度都有，所以有長(zhǎng)的帶，后面隨藥物濃度加大，似乎dna完全被降解，跑出泳道了， 建議重新提取樣品，采用新的試劑體系和電泳體系，如果還是同樣問(wèn)題，很可能你的藥不止嵌合DNA，而且是將其降解，藥物濃度越大，降解越徹底。 不知道其它蟲(chóng)友怎么解釋 |
6樓2013-01-22 14:20:34
zhang881007
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7樓2013-01-22 16:07:03
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我今天留意了一下。 發(fā)現(xiàn)是我藥物濃度高的時(shí)候，它會(huì)讓DNA發(fā)生沉淀的現(xiàn)象。 我直接可以在上樣孔中看到那些有色的顆粒，它們是進(jìn)不了膠的，只有溴酚藍(lán)那些才在走，其他的電泳完了還依然在孔里，在孔中可以看到那些加了藥物后的黃黃綠綠的沉淀。而銀染之后 就整個(gè)泳道是干干凈凈的 什么都沒(méi)有 但是 我后來(lái)降低藥物濃度再做了 發(fā)現(xiàn)還是不行 它雖然是有條帶跑出來(lái) 但是 依然是完全大拖尾 從孔中一直拖到前沿 沒(méi)有形成 規(guī)整的 一個(gè)個(gè)的 條帶 |
8樓2013-01-22 23:46:13
cdl007
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10樓2013-01-23 22:14:17
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