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cyjen新蟲 (初入文壇)
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[求助]
緊急求助！細胞免疫熒光染色失敗，細胞、試劑、抗體全換了還是做不出來
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細胞是IMCD3細胞，小鼠腎上皮纖毛細胞。之前從一家國內(nèi)公司訂的細胞，染得出骨架，染不出纖毛。這次換了新細胞，是師兄從進口細胞庫訂的，培養(yǎng)基是GIBCO的1640. 胰酶也是GIBCO的。一抗是小鼠單抗α-tubulin，染細胞骨架和纖毛；二抗是invitrogen的熒光二抗，紅色熒光，goat抗mouse. 我是4%PFA固定15min，20%羊血清室溫封閉半小時，一抗過夜，二抗過夜。一抗稀釋比例做過1:1000,1:800 protocol推薦1：1000就行。二抗按1:1000做。 染出來在顯微鏡下面什么都看不到，一片紅茫茫的，分不清背景跟細胞。期間一抗換了新的，從PBS、PFA到羊血清全部重新配了，做過37℃快染和過夜慢染，一次結(jié)果都沒有。好想哭。。。。求大神解救！ |
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