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2008liulin鐵蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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[求助]
活化形式的蛋白凋亡MARKER 如 caspase-3 parp 如何辦
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如題,其實(shí)這個(gè)問(wèn)題已經(jīng)看過(guò)很多解釋了,但是現(xiàn)在又面臨這個(gè)問(wèn)題,實(shí)在不知如何解決為好。 我買(mǎi)的是CST的抗體,PARP CASPASE-3 這兩個(gè)抗體都是技能顯示出總蛋白也能顯示出活化形式的蛋白,所以我在PAPER 中顯示時(shí)所有的FIGURES 中都包含了兩個(gè)帶,活化形式和未活化形式。問(wèn)題是: review 說(shuō)我的凋亡顯影不明顯(幾乎所有),事實(shí)上我覺(jué)得是明顯的,另外一個(gè)review 也沒(méi)有提到這個(gè)問(wèn)題。所以我懷疑這個(gè)審稿人是不是只看未活化形式,沒(méi)有看到剪切形式。(有些條帶未活化形式是沒(méi)有什么改變的,但是活化形式很明顯),F(xiàn)在我想把FIGURE 中所有的未活化形式都去除,只保留活化形式,不知道可以不可以?有師兄說(shuō),這樣子會(huì)讓審稿人覺(jué)得不好,不贊成這種做法。所以,糾結(jié)了,也不想好心改過(guò)去結(jié)果 被人家誤解,直接被拒,現(xiàn)在是大修。主要問(wèn)題也是處在這個(gè)審稿人身上,另外一個(gè)問(wèn)題很少。 所以,怎么辦?急求大神! |
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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是不是你的圖上標(biāo)記的不清楚審稿人沒(méi)注意到? 1.你現(xiàn)在樣品還有,需要重復(fù)的實(shí)驗(yàn)量不多,可以買(mǎi)個(gè)Cleaved Caspase 3抗體重復(fù)你的實(shí)驗(yàn),再用個(gè)別的方法檢測(cè)凋亡 2.沒(méi)法重復(fù)試驗(yàn),選一張和原來(lái)文章里面不同的圖,只顯示活化蛋白,把標(biāo)記做好,在信里解釋清楚,被拒了就果斷換雜志 |
鐵蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
金蟲(chóng) (小有名氣)
樓主你好!我也在做這兩個(gè)蛋白,用的抗體和你一樣,可是我的切割形式總是不出現(xiàn),或者是說(shuō)和我藥物濃度不成規(guī)律。我想問(wèn)下你,藥物作用細(xì)胞的時(shí)間點(diǎn)和出現(xiàn)切割條帶之間有關(guān)系嗎?而且對(duì)于Caspase-3 (35KD和17KD)和PRAP(116和85),是在一樣的實(shí)驗(yàn)條件下,同一張膜上做出來(lái)的嗎?還是把總蛋白和切割形式的在膠上切開(kāi),分別轉(zhuǎn)膜哦?我做這兩個(gè)蛋白老是做不好,覺(jué)得很郁悶,你能不能告訴我一些你的經(jīng)驗(yàn)哦? |

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