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2008liulin

鐵蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

[求助] 活化形式的蛋白凋亡MARKER 如 caspase-3 parp 如何辦

如題,其實(shí)這個(gè)問(wèn)題已經(jīng)看過(guò)很多解釋了,但是現(xiàn)在又面臨這個(gè)問(wèn)題,實(shí)在不知如何解決為好。
我買(mǎi)的是CST的抗體,PARP CASPASE-3 這兩個(gè)抗體都是技能顯示出總蛋白也能顯示出活化形式的蛋白,所以我在PAPER 中顯示時(shí)所有的FIGURES 中都包含了兩個(gè)帶,活化形式和未活化形式。問(wèn)題是:

review 說(shuō)我的凋亡顯影不明顯(幾乎所有),事實(shí)上我覺(jué)得是明顯的,另外一個(gè)review 也沒(méi)有提到這個(gè)問(wèn)題。所以我懷疑這個(gè)審稿人是不是只看未活化形式,沒(méi)有看到剪切形式。(有些條帶未活化形式是沒(méi)有什么改變的,但是活化形式很明顯),F(xiàn)在我想把FIGURE 中所有的未活化形式都去除,只保留活化形式,不知道可以不可以?有師兄說(shuō),這樣子會(huì)讓審稿人覺(jué)得不好,不贊成這種做法。所以,糾結(jié)了,也不想好心改過(guò)去結(jié)果 被人家誤解,直接被拒,現(xiàn)在是大修。主要問(wèn)題也是處在這個(gè)審稿人身上,另外一個(gè)問(wèn)題很少。 所以,怎么辦?急求大神!
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ccharlien

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2013-02-05 22:11:58
是不是你的圖上標(biāo)記的不清楚審稿人沒(méi)注意到?
1.你現(xiàn)在樣品還有,需要重復(fù)的實(shí)驗(yàn)量不多,可以買(mǎi)個(gè)Cleaved Caspase 3抗體重復(fù)你的實(shí)驗(yàn),再用個(gè)別的方法檢測(cè)凋亡
2.沒(méi)法重復(fù)試驗(yàn),選一張和原來(lái)文章里面不同的圖,只顯示活化蛋白,把標(biāo)記做好,在信里解釋清楚,被拒了就果斷換雜志
4樓2013-02-03 21:06:05
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2008liulin

鐵蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

引用回帖:
4樓: Originally posted by ccharlien at 2013-02-03 21:06:05
是不是你的圖上標(biāo)記的不清楚審稿人沒(méi)注意到?
1.你現(xiàn)在樣品還有,需要重復(fù)的實(shí)驗(yàn)量不多,可以買(mǎi)個(gè)Cleaved Caspase 3抗體重復(fù)你的實(shí)驗(yàn),再用個(gè)別的方法檢測(cè)凋亡
2.沒(méi)法重復(fù)試驗(yàn),選一張和原來(lái)文章里面不同的圖,只 ...

我太感謝你了!我的意思也是 我就把原來(lái)形式的給切了, 然后只放活化形式,并且在條帶下面LABLE,讓他能看清楚一下。怕就怕他把我拒了,我六月畢業(yè),來(lái)不及了,怕有萬(wàn)一就麻煩了。~~~愁死了~~~ 我再補(bǔ)圖,怕那個(gè)人還說(shuō)不清楚,那我就比較郁悶了~~~愁死了
5樓2013-02-03 23:01:49
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ccharlien

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

引用回帖:
5樓: Originally posted by 2008liulin at 2013-02-03 23:01:49
我太感謝你了!我的意思也是 我就把原來(lái)形式的給切了, 然后只放活化形式,并且在條帶下面LABLE,讓他能看清楚一下。怕就怕他把我拒了,我六月畢業(yè),來(lái)不及了,怕有萬(wàn)一就麻煩了。~~~愁死了~~~ 我再補(bǔ)圖,怕那個(gè)人 ...

不客氣哈,一般用兩個(gè)不同方法檢測(cè)凋亡就沒(méi)什么問(wèn)題了
最好有和之前稿子里差不多質(zhì)量的不一樣的圖,省得人看到后覺(jué)得你沒(méi)改找茬,不過(guò)要是沒(méi)有也就算了
把reviewer提到的其他問(wèn)題都搞定了盡快重新提交,祝好運(yùn)!
6樓2013-02-04 01:23:09
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乖乖寶貝

金蟲(chóng) (小有名氣)

樓主你好!我也在做這兩個(gè)蛋白,用的抗體和你一樣,可是我的切割形式總是不出現(xiàn),或者是說(shuō)和我藥物濃度不成規(guī)律。我想問(wèn)下你,藥物作用細(xì)胞的時(shí)間點(diǎn)和出現(xiàn)切割條帶之間有關(guān)系嗎?而且對(duì)于Caspase-3 (35KD和17KD)和PRAP(116和85),是在一樣的實(shí)驗(yàn)條件下,同一張膜上做出來(lái)的嗎?還是把總蛋白和切割形式的在膠上切開(kāi),分別轉(zhuǎn)膜哦?我做這兩個(gè)蛋白老是做不好,覺(jué)得很郁悶,你能不能告訴我一些你的經(jīng)驗(yàn)哦?
盡自己最大的努力,優(yōu)秀畢業(yè)!
7樓2013-02-19 14:22:51
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