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970402570新蟲 (初入文壇)
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[求助]
菌落PCR
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| 請問,做菌落PCR前要保留菌種,一般用固體培養(yǎng)基還是液體培養(yǎng)基?保存時(shí)放在什么條件下?保留的菌種干什么用?一般PCR退火溫度是多少?還有PCR之后還要必需做質(zhì)粒酶切鑒定鑒定嗎? |
銀蟲 (小有名氣)
新蟲 (初入文壇)
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
| 我的做法是用無菌槍頭挑菌落,點(diǎn)在固體平板上編號保存。然后用此槍頭直接在相同編號的PCR管里攪若干下去PCR。PCR退火溫度要根據(jù)不同引物來。平板是放37°C。一般早上做的話,下午平板就長好了,可以放到4度。由于PCR可能有假陽性,對PCR正確的克隆,挑保種的平板上相應(yīng)編號的克隆搖菌,小提質(zhì)粒做酶切鑒定。酶切鑒定正確的克隆送去測序(如果需要的話)。 |
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