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970402570新蟲 (初入文壇)
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[求助]
菌落PCR
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| 請(qǐng)問(wèn)，做菌落PCR前要保留菌種，一般用固體培養(yǎng)基還是液體培養(yǎng)基？保存時(shí)放在什么條件下？保留的菌種干什么用？一般PCR退火溫度是多少？還有PCR之后還要必需做質(zhì)粒酶切鑒定鑒定嗎？ |
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cicelyzh
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)分享經(jīng)驗(yàn) 2013-02-20 17:08:44
970402570: 金幣+1, ★有幫助 2013-02-24 20:47:52
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)分享經(jīng)驗(yàn) 2013-02-20 17:08:44
970402570: 金幣+1, ★有幫助 2013-02-24 20:47:52
| 我的做法是用無(wú)菌槍頭挑菌落，點(diǎn)在固體平板上編號(hào)保存。然后用此槍頭直接在相同編號(hào)的PCR管里攪若干下去PCR。PCR退火溫度要根據(jù)不同引物來(lái)。平板是放37°C。一般早上做的話，下午平板就長(zhǎng)好了，可以放到4度。由于PCR可能有假陽(yáng)性，對(duì)PCR正確的克隆，挑保種的平板上相應(yīng)編號(hào)的克隆搖菌，小提質(zhì)粒做酶切鑒定。酶切鑒定正確的克隆送去測(cè)序（如果需要的話）。 |
4樓2013-02-20 08:01:14
無(wú)疆@行者
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2樓2013-02-19 18:44:09
970402570
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3樓2013-02-19 21:03:15
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