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nuclearfan銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
關于雙標的免疫熒光很大困惑�。�！
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求高手解答：本人用免疫熒光檢測一個復雜細胞類型的組織切片某蛋白的表達，用一個mouse源的抗體標記細胞類型，用另一個Rabbit源的抗體標記這個蛋白。在此之前我已經用DAB的IHC（ABC法）對單獨的抗體實驗成功，對照同樣沒有問題，分別的抗體陽性的細胞類型應該是部分重合或根本不重合。免疫熒光的2抗是488標的donkey anti-Mouse和594標的donkey anti-Rabbit（都是Santa的），封閉使用的羊血清不少于3小時，一抗1：100稀釋4度過夜，洗滌5X3，二抗1：200 RT 1小時。這幾次的結果是通過merge后 完全重合。后來我補充了個實驗，只用單一的mouse源一抗和抗mouse的2抗做了個簡單的對照（488），分別用綠光 藍光 黃光激發(fā)，發(fā)現都能打出相同位置的光，只是顏色不同（普通的電鏡不是共聚焦）。 我很困惑，求高手耐心解答��！在線等！！如有不明確的，可以指出，我重新說明 |
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3樓2013-02-24 20:31:03
2樓2013-02-24 20:29:13
4樓2017-11-27 21:44:43
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