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XXH_QB

木蟲 (正式寫手)

[交流] LIVE/DEAD® BacLight™ Bacterial Viability Kits測定E.coli濃度 已有9人參與

如題,實驗需要用LIVE/DEAD® BacLight™ Bacterial Viability Kits測定E.coli濃度,文獻上說的是先染色,再The stained bacteria were imaged with an epifluorescence microscope (Olympus) with a U-filter (364 nm) for imaging cells stained with both PI and DAPI and an IB filter (464 nm) for detecting cells stained with only PI。
請問染色后,定量部分具體如何操作,需要什么儀器呢?
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mizhoulong

木蟲 (著名寫手)

環(huán)境衛(wèi)生、微生物學

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
zhangxingc: 金幣+5, 鼓勵有價值回帖,獎勵一下 2013-02-25 09:09:48
使細菌盡量均勻分布于黑色膜上,黑色膜一般使用25mm的好像,

顯微鏡下的視野面積可以從物鏡的型號得知,

數顯微鏡視野下的菌數,變化視野,再數,至少數10個視野以上,取平均值,

然后通過一個系數換算出膜上的細菌數。

這樣數有一定的風險,就是細菌在膜上分布不均勻,盡量數很多視野,視野遍布黑色膜的各個部分。

這種方法在很多文獻上可以查到。
環(huán)境衛(wèi)生、微生物學、衛(wèi)生應急
2樓2013-02-25 08:53:10
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tina2013liti

新蟲 (初入文壇)


小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
用熒光顯微鏡拍照,數數目,或者用軟件計算熒光面積,也能得到細菌數量
10樓2013-12-10 13:52:06
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普通回帖

mizhoulong

木蟲 (著名寫手)

環(huán)境衛(wèi)生、微生物學

幾年前做過,等我回國后還要做這個實驗
環(huán)境衛(wèi)生、微生物學、衛(wèi)生應急
3樓2013-02-25 08:53:58
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XXH_QB

木蟲 (正式寫手)

引用回帖:
2樓: Originally posted by mizhoulong at 2013-02-25 08:53:10
使細菌盡量均勻分布于黑色膜上,黑色膜一般使用25mm的好像,

顯微鏡下的視野面積可以從物鏡的型號得知,

數顯微鏡視野下的菌數,變化視野,再數,至少數10個視野以上,取平均值,

然后通過一個系數換算出膜 ...

回答我的還是前輩啊感動~~
我需要測試兩種情況下的大腸桿菌濃度:1、溶液里的E.coli濃度;2、薄膜上截留的E.coli濃度
今天上午咨詢了試劑公司技術部門,他們說染色后能用熒光顯微鏡下照相并計數,兩種情況都行(文獻是這么做的,具體詳細的沒提到);可是打電話給學院負責熒光顯微鏡的老師,他卻說只能用透光的玻片來做。
    前輩說的黑色膜透光嗎?哪里可以買到呢?
4樓2013-02-25 12:13:00
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XXH_QB

木蟲 (正式寫手)

引用回帖:
3樓: Originally posted by mizhoulong at 2013-02-25 08:53:58
幾年前做過,等我回國后還要做這個實驗

找到說明書了,慢慢啃
5樓2013-02-25 13:24:13
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mizhoulong

木蟲 (著名寫手)

環(huán)境衛(wèi)生、微生物學


小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
black membrane is not transparent, it can be acquired from Whatman or Millipore.

maybe my fluorescence microscope is different from yours.

there are some Chinese articles about this method.
環(huán)境衛(wèi)生、微生物學、衛(wèi)生應急
6樓2013-02-26 00:19:45
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tina2013liti

新蟲 (初入文壇)


小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
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2樓: Originally posted by mizhoulong at 2013-02-25 08:53:10
使細菌盡量均勻分布于黑色膜上,黑色膜一般使用25mm的好像,

顯微鏡下的視野面積可以從物鏡的型號得知,

數顯微鏡視野下的菌數,變化視野,再數,至少數10個視野以上,取平均值,

然后通過一個系數換算出膜 ...

請問,我想做活性炭上面的微生物量,混合種群的,用DAPI染色好呢,還是LIVE/DEAD好,哪個經濟些
7樓2013-12-08 11:50:56
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XXH_QB

木蟲 (正式寫手)

引用回帖:
7樓: Originally posted by tina2013liti at 2013-12-08 11:50:56
請問,我想做活性炭上面的微生物量,混合種群的,用DAPI染色好呢,還是LIVE/DEAD好,哪個經濟些...

LIVE/DEAD包括PI 和DAPI
8樓2013-12-08 15:28:33
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mizhoulong

木蟲 (著名寫手)

環(huán)境衛(wèi)生、微生物學


小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包,謝謝回帖
引用回帖:
7樓: Originally posted by tina2013liti at 2013-12-08 11:50:56
請問,我想做活性炭上面的微生物量,混合種群的,用DAPI染色好呢,還是LIVE/DEAD好,哪個經濟些...

效果是LIVE/DEAD好,DAPI染色肯定經濟,DAPI染色我試過幾次,可能因為自己技術不過關,都沒成功,后來用了是LIVE/DEAD,就再也沒有其他的了
環(huán)境衛(wèi)生、微生物學、衛(wèi)生應急
9樓2013-12-08 16:12:29
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