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woerjianbo木蟲 (小有名氣)
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[求助]
想通過SPDP連接蛋白質(zhì)和多肽，加入DTT會(huì)破壞蛋白質(zhì)本身的二硫鍵嗎
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wizardfan: 金幣+3, 謝謝分享經(jīng)驗(yàn) 2013-03-02 09:16:23
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SPDP實(shí)際上一般用于酶和蛋白之間的偶聯(lián)，首先與兩者之中的一個(gè)的伯氨基反應(yīng)。之后將另外一個(gè)巰基化，然后將SPDP活化的物質(zhì)用還原劑（如TCEP）還原出巰基，再與巰基化的另外一個(gè)物質(zhì)反應(yīng)，生成二硫鍵。這樣就得到了偶聯(lián)物。 蛋白和多肽的偶聯(lián)你可以不用這種偶聯(lián)劑。建議選用MBS或者SMCC或者Sulfo-SMCC。這樣只需要多肽末端含有巰基就可以。當(dāng)然如果多肽上不含有巰基，你可以在合成多肽的時(shí)候自己在末端添加�；蛘呤歉鶕�(jù)多肽序列上含有的伯氨基或者羧基個(gè)數(shù)，來選用其他的偶聯(lián)方法，如EDC或者GA法。 |
8樓2013-03-01 12:43:37
xiaoqi5992
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2樓2013-02-27 08:40:44
woerjianbo
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3樓2013-02-27 09:37:25
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【答案】應(yīng)助回帖
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wizardfan: 金幣+2, 謝謝參與 2013-02-28 05:37:42
wizardfan: 金幣+2, 謝謝參與 2013-02-28 05:37:42
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SPDP我沒有用過，“SPDP，一種異-雙官能試劑，用于結(jié)合兩種不同的蛋白質(zhì)，諸如酶和抗體。SPDP首先經(jīng)由其氨基與一個(gè)蛋白質(zhì)分子反應(yīng)。SPDP向該蛋白質(zhì)中引入吡啶二硫基，接著該吡啶二硫基由DTT還原形成硫醇基。這些硫醇基接著與另一蛋白質(zhì)分子形成二硫鍵，從而產(chǎn)生異二聚物蛋白質(zhì)”這是在百度百科查到的。 DTT經(jīng)常用來打開蛋白質(zhì)的二硫鍵，像做變性PAGE等都用到了DTT。 你這個(gè)SPDP修飾的問題還得請(qǐng)教高人啊。 |
4樓2013-02-27 11:02:10
woerjianbo
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5樓2013-02-27 11:11:31
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6樓2013-02-28 08:26:30
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7樓2013-02-28 08:58:37
woerjianbo
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9樓2013-03-01 16:05:47
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woerjianbo: 金幣+10, ★★★很有幫助 2013-03-01 18:54:49
woerjianbo: 金幣+10, ★★★很有幫助 2013-03-01 18:54:49
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至于你說的反應(yīng)效率這個(gè)我不是很清楚，因?yàn)槲覜]用這個(gè)偶聯(lián)劑做過，個(gè)人不建議用這個(gè)試劑，因?yàn)榉磻?yīng)步驟和添加的試劑較多，還是建議使用我推薦的試劑。 至于區(qū)別你還是自己查查吧，網(wǎng)上很多的。 你提到的BSA上的氨基反應(yīng)率很低，你的反應(yīng)條件有問題�。肯衽c載體蛋白的氨基反應(yīng)的反應(yīng)率感覺還是蠻高的。 說實(shí)話，你既然有這個(gè)偶聯(lián)劑，那就必然有該試劑的說明書，建議你認(rèn)真研究下你的說明書吧。 |
10樓2013-03-01 16:17:18
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