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園藝學(xué)童銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
miRNA提取和引物設(shè)計(jì)，想做實(shí)時(shí)定量檢測(cè)下表達(dá)量 已有1人參與
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最近想做有關(guān)miRNA的，不知道大家都是怎么提取的呀，聽說用提取RNA的試劑盒也能提取，怎么純化出來呢？ 還有，引物大家都是怎么設(shè)計(jì)的啊，有軟件么?內(nèi)參怎么選得呢，植物，目前還米有數(shù)據(jù)庫(kù)呢。。 [ Last edited by 園藝學(xué)童 on 2013-2-27 at 22:23 ] |
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園藝學(xué)童: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-03-01 12:31:34
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植物miRNA提取可用天根的植物miRNA提取試劑盒，可以同時(shí)提取總RNA(用于miRNA靶基因的定量分析)和小RNA(用于miRNA的定量分析)。 miRNA的定量通常有兩種方法： (1) 用Invitrongen或者Qiagen的miRNA定量試劑盒，試劑盒中包括一條通用引物，原理是將小RNA加上一段特異序列，其中包括與通用引物互補(bǔ)的一段序列，通過后續(xù)自己針對(duì)自己研究的miRNA設(shè)計(jì)的特異引物，這樣就有了上下游引物用于miRNA的定量研究了； (2) 用針對(duì)自己研究的miRNA特異設(shè)計(jì)的探針進(jìn)行定量。 miRNA的引物也根據(jù)兩種方法而分別設(shè)計(jì)、合成各自的引物即可，相關(guān)中英文文獻(xiàn)都能查閱到。 我知道的就這些了，歡迎其他人補(bǔ)充。 |
7樓2013-02-28 14:27:19
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