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園藝學(xué)童銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
miRNA提取和引物設(shè)計(jì)，想做實(shí)時(shí)定量檢測(cè)下表達(dá)量 已有1人參與
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最近想做有關(guān)miRNA的，不知道大家都是怎么提取的呀，聽(tīng)說(shuō)用提取RNA的試劑盒也能提取，怎么純化出來(lái)呢？ 還有，引物大家都是怎么設(shè)計(jì)的啊，有軟件么?內(nèi)參怎么選得呢，植物，目前還米有數(shù)據(jù)庫(kù)呢。。 [ Last edited by 園藝學(xué)童 on 2013-2-27 at 22:23 ] |
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你是通過(guò)miRNA沉默目的基因的表達(dá)嗎 檢測(cè)目的基因被沉默的程度 那么需要提總RNA 知道目的基因的序列 在目的基因上找一段長(zhǎng)度約為18~24的序列作為一端引物，另一端引物距離前一個(gè)引物1000bp以?xún)?nèi)，兩引物之間跨過(guò)大于200bp的內(nèi)含子，兩引物TM值在55-65之間，然后把克隆的出的目的片段，跟基因庫(kù)BLAST,來(lái)看引物克隆出來(lái)片段的序列特異性，要是特異性不好的話(huà)就重新選擇序列，特異性不好會(huì)把其他的基因克隆出來(lái)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確。 |
10樓2013-03-04 08:55:56
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4樓2013-02-28 12:27:32
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