 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2166 | 回復: 10 | ||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
Jane19900526金蟲 (初入文壇)
|
[求助]
赤霉菌原生質(zhì)體制備，制不出來，求大神幫助~~~急~~~
|
|
|
我最近一直在做赤霉菌原生質(zhì)體制備，參考的是張文宣 趙南 朱江萍的赤霉素產(chǎn)生菌原生質(zhì)體制備、純化與再生工藝的研究，按照他的方法，配制2%纖維素酶，1%蝸牛酶和0.1%溶菌酶，用的溶液是高滲溶液（0.7M NaCl），酶液用0.2μm水系濾膜過濾待用。 做過（1）赤霉菌平板上的菌絲直接加到酶液中放在30℃恒溫箱中酶解（適當振蕩），每隔0.5h用油鏡觀察。 （2）液體培養(yǎng)基培養(yǎng)24h后，用4層擦鏡紙過濾得孢子懸液，7000rpm離心10min之后，用高滲溶液洗滌2次之后，用高滲溶液重懸，取一定量到酶液中放在30℃恒溫箱中酶解（適當振蕩），由于放在載玻片上不能使液體干了之后觀察，加入香柏油之后油鏡觀察看到圓形物質(zhì)，學長說是氣泡，所以直接用相差顯微鏡觀察，每隔0.5h觀察，觀察了5h都沒有發(fā)現(xiàn)圓形或球形。。。 （3）所以我以為是酶液的濃度不夠，還有孢子的細胞壁比菌絲的細胞壁厚，我配制了4%纖維素酶，2%蝸牛酶，重復上述步驟，還是觀察不到原生質(zhì)體。。。 （上述都在無菌環(huán)境下進行） 不知道是什么原因，請大神指點迷津，萬分感激！�。� |
回復此樓» 猜你喜歡
材料與化工調(diào)劑一志愿大連海事085600，349
已經(jīng)有4人回復
-
甲基亞磺磺酸鈉和甲基磺酸酯反應(yīng)機理
已經(jīng)有4人回復
-
理學07化學 303求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復
-
一志愿大連理工大學材料求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復
-
085600材料與化工調(diào)劑
已經(jīng)有11人回復
-
生物考研337分求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復
-
材料求調(diào)劑 一志愿哈工大總分298分，前三科223分
已經(jīng)有9人回復
-
哈爾濱工業(yè)大學材料與化工專碩378求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復
-
求調(diào)劑，一志愿 南京航空航天大學 ，080500材料科學與工程學碩，總分289分
已經(jīng)有9人回復
-
材料科學與工程求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 鏈霉菌原生質(zhì)體制備及融合育種求助
已經(jīng)有5人回復
- 霉菌原生質(zhì)體制備中纖維素酶的溶解問題
已經(jīng)有9人回復
- 鏈霉菌原生質(zhì)體法轉(zhuǎn)化容易嗎？
已經(jīng)有5人回復
Jane19900526
金蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1326.8
- 帖子: 17
- 在線: 11.8小時
- 蟲號: 2307787
- 注冊: 2013-02-28
- 性別: MM
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學
5樓2013-03-05 11:47:54
Jane19900526
金蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1326.8
- 帖子: 17
- 在線: 11.8小時
- 蟲號: 2307787
- 注冊: 2013-02-28
- 性別: MM
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學
2樓2013-03-04 12:04:43
zhqw423
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 13 (小學生)
- 金幣: 3280.5
- 散金: 521
- 紅花: 5
- 沙發(fā): 3
- 帖子: 1297
- 在線: 138.7小時
- 蟲號: 457748
- 注冊: 2007-11-12
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物學
|
我看過這方面的資料，但自己還沒開始做，不過看了你的操作，可以給你一點建議： 1. 菌絲采用對數(shù)期菌絲，培養(yǎng)24h可能有點短，你要保證開始有足夠的菌絲量（用新鮮菌絲比活化的孢子好些，可以多培養(yǎng)幾瓶，鏡檢菌絲形態(tài)確定）； 2. 4層擦鏡紙過濾，可能太厚了，因為真菌無論菌絲還是孢子都比較粗大，我們平常過濾放線菌也就用2層擦鏡紙，你用4層，可能收集到的菌絲量會很少（可以對濾液進行鏡檢確定一下），過濾前，可以加入玻璃珠對菌絲振蕩一下，將菌絲打成片段，這樣肯那個會好些； 3. 赤霉菌本身在40倍下即可觀察，其原生質(zhì)體直徑應(yīng)該比菌絲直徑大些，所以你用相差顯微鏡在40倍下應(yīng)該就可以清楚觀察到，不必使用油鏡（避免油中水泡干擾）。 4.實在不確定，你就放到高滲再生平板上，看能否再生。 一些建議，希望對你有幫助。 |
3樓2013-03-05 09:59:47
zhqw423
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 13 (小學生)
- 金幣: 3280.5
- 散金: 521
- 紅花: 5
- 沙發(fā): 3
- 帖子: 1297
- 在線: 138.7小時
- 蟲號: 457748
- 注冊: 2007-11-12
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物學
4樓2013-03-05 10:02:31
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0703一志愿9，初試成績：338，四六級已過，有科研經(jīng)歷，求調(diào)劑！ +7 | Zuhui0306 2026-03-25 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 26考研-291分-廈門大學（085601）-柔性電子學院材料工程專業(yè)求調(diào)劑 +5 | min3 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +14 | junqihahaha 2026-03-26 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 070300一志愿211，312分求調(diào)劑院校 +4 | 小黃鴨寶 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +5 | wei-5 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京理工大學本科211材料工程294求調(diào)劑 +8 | mikasa的圍巾 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 349求調(diào)劑 +6 | 李木子啊哈哈 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 330分求調(diào)劑 +5 | qzenlc 2026-03-29 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +7 | 江辭666 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 本科新能源科學與工程，一志愿華理能動285求調(diào)劑 +7 | AZMK 2026-03-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 312，生物學求調(diào)劑 +3 | 小譯同學abc 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 322求調(diào)劑 +5 | 舊吢 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085405 考的11408求各位老師帶走 +3 | Qiu學ing 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 張芳銘-中國農(nóng)業(yè)大學-環(huán)境工程專碩-298 +4 | 手機用戶 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分，求調(diào)劑 +9 | 大饞小子 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 +5 | .m.. 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學338求調(diào)劑！ +6 | Zuhui0306 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑求收留 +7 | 果然有我 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研]
 085602化學工程求調(diào)劑。
+4
|
平樂樂樂 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉林大學材料與化工303分求調(diào)劑 +4 | 為學666 2026-03-24 | 4/200 |
|