 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2141 | 回復: 10 | ||
Jane19900526金蟲 (初入文壇)
|
[求助]
赤霉菌原生質體制備，制不出來，求大神幫助~~~急~~~
|
|
|
我最近一直在做赤霉菌原生質體制備，參考的是張文宣 趙南 朱江萍的赤霉素產生菌原生質體制備、純化與再生工藝的研究，按照他的方法，配制2%纖維素酶，1%蝸牛酶和0.1%溶菌酶，用的溶液是高滲溶液（0.7M NaCl），酶液用0.2μm水系濾膜過濾待用。 做過（1）赤霉菌平板上的菌絲直接加到酶液中放在30℃恒溫箱中酶解（適當振蕩），每隔0.5h用油鏡觀察。 （2）液體培養(yǎng)基培養(yǎng)24h后，用4層擦鏡紙過濾得孢子懸液，7000rpm離心10min之后，用高滲溶液洗滌2次之后，用高滲溶液重懸，取一定量到酶液中放在30℃恒溫箱中酶解（適當振蕩），由于放在載玻片上不能使液體干了之后觀察，加入香柏油之后油鏡觀察看到圓形物質，學長說是氣泡，所以直接用相差顯微鏡觀察，每隔0.5h觀察，觀察了5h都沒有發(fā)現(xiàn)圓形或球形。。。 （3）所以我以為是酶液的濃度不夠，還有孢子的細胞壁比菌絲的細胞壁厚，我配制了4%纖維素酶，2%蝸牛酶，重復上述步驟，還是觀察不到原生質體。。。 （上述都在無菌環(huán)境下進行） 不知道是什么原因，請大神指點迷津，萬分感激�。�！ |
回復此樓» 猜你喜歡
一志愿西安交通大學材料工程專業(yè) 282分求調劑
已經有6人回復
-
085600材料與化工調劑 324分
已經有10人回復
-
294求調劑材料與化工專碩
已經有11人回復
-
一志愿南昌大學，327分，材料與化工085600
已經有3人回復
-
321求調劑
已經有7人回復
-
288求調劑
已經有6人回復
-
287求調劑
已經有4人回復
-
招收調劑碩士
已經有7人回復
-
085601材料工程專碩求調劑
已經有8人回復
-
一志愿武漢理工材料工程專碩調劑
已經有3人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 鏈霉菌原生質體制備及融合育種求助
已經有5人回復
- 霉菌原生質體制備中纖維素酶的溶解問題
已經有9人回復
- 鏈霉菌原生質體法轉化容易嗎？
已經有5人回復
zhqw423
木蟲 (著名寫手)
- 應助: 13 (小學生)
- 金幣: 3280.5
- 散金: 521
- 紅花: 5
- 沙發(fā): 3
- 帖子: 1297
- 在線: 138.7小時
- 蟲號: 457748
- 注冊: 2007-11-12
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物學
|
我看過這方面的資料，但自己還沒開始做，不過看了你的操作，可以給你一點建議： 1. 菌絲采用對數(shù)期菌絲，培養(yǎng)24h可能有點短，你要保證開始有足夠的菌絲量（用新鮮菌絲比活化的孢子好些，可以多培養(yǎng)幾瓶，鏡檢菌絲形態(tài)確定）； 2. 4層擦鏡紙過濾，可能太厚了，因為真菌無論菌絲還是孢子都比較粗大，我們平常過濾放線菌也就用2層擦鏡紙，你用4層，可能收集到的菌絲量會很少（可以對濾液進行鏡檢確定一下），過濾前，可以加入玻璃珠對菌絲振蕩一下，將菌絲打成片段，這樣肯那個會好些； 3. 赤霉菌本身在40倍下即可觀察，其原生質體直徑應該比菌絲直徑大些，所以你用相差顯微鏡在40倍下應該就可以清楚觀察到，不必使用油鏡（避免油中水泡干擾）。 4.實在不確定，你就放到高滲再生平板上，看能否再生。 一些建議，希望對你有幫助。 |
3樓2013-03-05 09:59:47
zhqw423
木蟲 (著名寫手)
- 應助: 13 (小學生)
- 金幣: 3280.5
- 散金: 521
- 紅花: 5
- 沙發(fā): 3
- 帖子: 1297
- 在線: 138.7小時
- 蟲號: 457748
- 注冊: 2007-11-12
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物學
9樓2013-03-06 10:32:22
Jane19900526
金蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1326.8
- 帖子: 17
- 在線: 11.8小時
- 蟲號: 2307787
- 注冊: 2013-02-28
- 性別: MM
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學
2樓2013-03-04 12:04:43
zhqw423
木蟲 (著名寫手)
- 應助: 13 (小學生)
- 金幣: 3280.5
- 散金: 521
- 紅花: 5
- 沙發(fā): 3
- 帖子: 1297
- 在線: 138.7小時
- 蟲號: 457748
- 注冊: 2007-11-12
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物學
4樓2013-03-05 10:02:31
Jane19900526
金蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1326.8
- 帖子: 17
- 在線: 11.8小時
- 蟲號: 2307787
- 注冊: 2013-02-28
- 性別: MM
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學
5樓2013-03-05 11:47:54
Jane19900526
金蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1326.8
- 帖子: 17
- 在線: 11.8小時
- 蟲號: 2307787
- 注冊: 2013-02-28
- 性別: MM
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學
6樓2013-03-05 11:55:42
zhqw423
木蟲 (著名寫手)
- 應助: 13 (小學生)
- 金幣: 3280.5
- 散金: 521
- 紅花: 5
- 沙發(fā): 3
- 帖子: 1297
- 在線: 138.7小時
- 蟲號: 457748
- 注冊: 2007-11-12
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物學
7樓2013-03-05 16:26:41
Jane19900526
金蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1326.8
- 帖子: 17
- 在線: 11.8小時
- 蟲號: 2307787
- 注冊: 2013-02-28
- 性別: MM
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學
8樓2013-03-05 19:40:54
Jane19900526
金蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1326.8
- 帖子: 17
- 在線: 11.8小時
- 蟲號: 2307787
- 注冊: 2013-02-28
- 性別: MM
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學
10樓2013-03-06 17:57:52
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 Jane19900526 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料專碩英一數(shù)二306 +5 | z1z2z3879 2026-03-18 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 0703化學 305求調劑 +4 | FY_yy 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703化學調劑，求各位老師收留 +10 | 秋有木北 2026-03-14 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 328求調劑，英語六級551，有科研經歷 +3 | 生物工程調劑 2026-03-17 | 7/350 |
|
|
[考研] 295求調劑 +3 | 一志愿京區(qū)211 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085601專碩，總分342求調劑，地區(qū)不限 +5 | share_joy 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 環(huán)境領域全國重點實驗室招收博士1-2名 +3 | QGZDSYS 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學調劑 +3 | 妮妮ninicgb 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 326求調劑 +5 | 上岸的小葡 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 290求調劑 +6 | 孔志浩 2026-03-12 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩274一志愿211求調劑 +6 | 薛云鵬 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 302求調劑 +4 | 小賈同學123 2026-03-15 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 考研調劑 +3 | 淇ya_~ 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 東南大學364求調劑 +5 | JasonYuiui 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 藥學383 求調劑 +3 | 藥學chy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 機械專碩325，尋找調劑院校 +3 | y9999 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 326求調劑 +3 | mlpqaz03 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 本科南京大學一志愿川大藥學327 +3 | 麥田耕者 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 330求調劑 +3 | ?醬給調劑跪了 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料工程調劑 +9 | 咪咪空空 2026-03-12 | 9/450 |
|