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czc945

新蟲 (初入文壇)

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專業(yè): 食品科學(xué)基礎(chǔ)

[求助] 熒光原位雜交實驗求助

我想做細(xì)菌的計數(shù)，用熒光原位雜交的方法，可是在熒光顯微鏡下‘；用40X鏡頭只看到DAPI紫外下的藍(lán)色，而看不到探針綠光激發(fā)出的顏色，是沒雜交上嗎？基本在綠光下沒有東西，誠心求各位研友幫忙解答下。我的實驗步驟如下。
1、菌液稀釋（大腸桿菌，腸球菌，乳酸菌），4%多聚甲醛固定1h，10000rpm離心5min，去上清，1XPBS重懸。重復(fù)兩次。

2、玻片鉻明膠處理

3、10μ菌液涂勻

4、37℃烘干

5、10xPBS洗兩次，一次5min。

6、梯度乙醇脫水

6.1、加10μ 1mg/mL溶菌酶

6.2、37℃孵育15min

6.3、梯度乙醇脫水

7、加10μ蛋白酶K（1mg/mL）

8、37℃孵育半小時

9、梯度乙醇脫水

10、加雜交液，加蓋玻片，濕盒中46℃預(yù)雜交30min

11、梯度乙醇脫水

12、加探針雜交液（EUB388探針），加蓋玻片，46℃雜交過夜

13、預(yù)熱到48℃洗脫液洗脫20min。然后DAPI染色。

14、熒光顯微鏡鏡檢。

回復(fù)此樓

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1樓 2013-03-04 16:36:01

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

慢曉慢

新蟲 (初入文壇)

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【答案】應(yīng)助回帖

我也在做EUB338，感覺也是雜交不上，在顯微鏡下觀察到的感覺不是細(xì)菌，請問你的問題解決了么

贊一下

回復(fù)此樓

2樓2013-06-19 20:58:20

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