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czc945新蟲 (初入文壇)
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[求助]
熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)求助
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我想做細(xì)菌的計(jì)數(shù)，用熒光原位雜交的方法，可是在熒光顯微鏡下‘；用40X鏡頭只看到DAPI紫外下的藍(lán)色，而看不到探針綠光激發(fā)出的顏色，是沒雜交上嗎？基本在綠光下沒有東西，誠心求各位研友幫忙解答下。我的實(shí)驗(yàn)步驟如下。 1、菌液稀釋（大腸桿菌，腸球菌，乳酸菌），4%多聚甲醛固定1h，10000rpm離心5min，去上清，1XPBS重懸。重復(fù)兩次。 2、玻片鉻明膠處理 3、10μ菌液涂勻 4、37℃烘干 5、10xPBS洗兩次，一次5min。 6、梯度乙醇脫水 6.1、加10μ 1mg/mL溶菌酶 6.2、37℃孵育15min 6.3、梯度乙醇脫水 7、加10μ蛋白酶K（1mg/mL） 8、37℃孵育半小時(shí) 9、梯度乙醇脫水 10、加雜交液，加蓋玻片，濕盒中46℃預(yù)雜交30min 11、梯度乙醇脫水 12、加探針雜交液（EUB388探針），加蓋玻片，46℃雜交過夜 13、預(yù)熱到48℃洗脫液洗脫20min。然后DAPI染色。 14、熒光顯微鏡鏡檢。 |
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慢曉慢
新蟲 (初入文壇)
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- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
2樓2013-06-19 20:58:20
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