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weizhi111至尊木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
全式金的表達(dá)載體pEASY-E2表達(dá)蛋白失敗
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| 誰(shuí)用過(guò)全式金的表達(dá)載體pEASY-E2？我連接上了，測(cè)序正確，目的條帶1000bp左右，用這個(gè)載體誘導(dǎo)表達(dá)，OD=0.4和OD 0.6都試了，IPTG濃度為0.8mM，誘導(dǎo)4h和過(guò)夜都試了，就是在誘導(dǎo)完的菌體總蛋白中沒(méi)有看到明顯的誘導(dǎo)后的目的帶，而且我做了2個(gè)蛋白都這樣，不知道為什么？有沒(méi)有用過(guò)這個(gè)載體的大俠，請(qǐng)求分享經(jīng)驗(yàn)，謝拉！ |
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2樓2013-03-05 08:17:46
yesali
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
weizhi111: 金幣+2, ★★★很有幫助 2013-03-05 23:25:30
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反正構(gòu)建載體也就是一部重組的問(wèn)題，在下次構(gòu)建載體時(shí)，可以構(gòu)建一個(gè)只帶GFP的載體，你可以根據(jù)菌體的顏色來(lái)確定你的蛋白表達(dá)量。方便你調(diào)整IPTG的濃度和遇到時(shí)間。 當(dāng)然你也可以換其他載體試試，如PET系列的，這種載體一般實(shí)驗(yàn)室都有，你可以找同學(xué)借。 |
3樓2013-03-05 10:18:00
weizhi111
至尊木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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4樓2013-03-05 23:28:28
yesali
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5樓2013-03-06 08:49:21
weizhi111
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6樓2013-03-07 18:00:38
ddtao 
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建議用Polycysteine-dendritic poly(His,Arg)1:5試一試 http://www.novel-polylysine.com/main/home/htm.php?nowmenuid=2 huiyisu@126.com |
7樓2016-04-02 12:51:25
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