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30937747木蟲 (小有名氣)
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[求助]
共表達(dá)載體只表達(dá)出一個(gè)蛋白
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| 我用的是pETDuet-1共表達(dá)載體，移碼突變的問(wèn)題已經(jīng)考慮過(guò)了，導(dǎo)師也看過(guò)應(yīng)該不存在問(wèn)題。我按順序連了A、B兩個(gè)基因上去，A和B基因的最后都帶了終止密碼子。電轉(zhuǎn)至BL21后在30℃和37℃進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)（4h），但都是只表達(dá)了B這個(gè)蛋白，請(qǐng)問(wèn)是什么原因? |
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| 原核的共表達(dá)沒做過(guò)，真核的共表達(dá)做過(guò)。我的建議：如果共表達(dá)載體只檢測(cè)出一個(gè)目的蛋白，不妨換用雙載體（比例1:1）共轉(zhuǎn)化試一試？ |
15樓2012-06-08 15:02:26
susizheng
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pETDuet-1有兩個(gè)單獨(dú)的t7-MCS，兩個(gè)基因前面是否都有t7。 如果兩個(gè)基因都有t7,建議先將A單獨(dú)表達(dá)看看，有可能A基因不適合在大腸中表達(dá)。 |
2樓2012-06-05 10:35:10
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