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木蟲(chóng) (小有名氣)

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[求助] 共表達(dá)載體只表達(dá)出一個(gè)蛋白

我用的是pETDuet-1共表達(dá)載體，移碼突變的問(wèn)題已經(jīng)考慮過(guò)了，導(dǎo)師也看過(guò)應(yīng)該不存在問(wèn)題。我按順序連了A、B兩個(gè)基因上去，A和B基因的最后都帶了終止密碼子。電轉(zhuǎn)至BL21后在30℃和37℃進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)（4h），但都是只表達(dá)了B這個(gè)蛋白，請(qǐng)問(wèn)是什么原因?

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我依舊會(huì)努力.

1樓 2012-06-01 17:10:26

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2樓: Originally posted by susizheng at 2012-06-05 10:35:10
pETDuet-1有兩個(gè)單獨(dú)的t7-MCS，兩個(gè)基因前面是否都有t7。
如果兩個(gè)基因都有t7,建議先將A單獨(dú)表達(dá)看看，有可能A基因不適合在大腸中表達(dá)。

單獨(dú)表達(dá)我已經(jīng)在BL21里做過(guò)了,是沒(méi)有問(wèn)題的

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3樓2012-06-05 20:05:46

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susizheng

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30937747: 金幣+1, 感謝交流 2012-06-17 08:57:26

pETDuet-1有兩個(gè)單獨(dú)的t7-MCS，兩個(gè)基因前面是否都有t7。
如果兩個(gè)基因都有t7,建議先將A單獨(dú)表達(dá)看看，有可能A基因不適合在大腸中表達(dá)。

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Thank-you，so-blue.

2樓2012-06-05 10:35:10

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caoluoyuan

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【答案】應(yīng)助回帖

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30937747: 金幣+3, ★有幫助 2012-06-06 08:51:00
30937747: 金幣+1, 做出來(lái)了。 2012-06-17 08:56:00

pETDuet-1雙啟動(dòng)子、A基因順序有沒(méi)有搞錯(cuò)？

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4樓2012-06-06 08:26:15

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引用回帖:

4樓: Originally posted by caoluoyuan at 2012-06-06 08:26:15
pETDuet-1雙啟動(dòng)子、A基因順序有沒(méi)有搞錯(cuò)？

我都測(cè)序過(guò)的

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5樓2012-06-06 08:50:52

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