 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2776 | 回復(fù): 3 | |||
[求助]
同時(shí)表達(dá)兩種蛋白表達(dá)問題
|
|||
| 各位蟲友，本人最近在做蛋白表達(dá)的實(shí)驗(yàn)，是將兩個(gè)目的蛋白基因通過RBS相連接的方式克隆到pET30a表達(dá)載體上，用的是較強(qiáng)大的T7啟動(dòng)子，可是跑SDS-PAGE顯示只表達(dá)了一種蛋白，其中RBS后面的蛋白沒有表達(dá)，測序也都是正確！不知問題出在哪了？各位有做這種同時(shí)表達(dá)兩種蛋白的嗎？你們是通過什么方式同時(shí)表達(dá)兩種蛋白？謝謝…… |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 1號(hào)文摘 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有196人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 有關(guān)蛋白表達(dá)的問題
已經(jīng)有25人回復(fù)
- 目的蛋白表達(dá)的問題
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 關(guān)于蛋白表達(dá)的問題
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 膜蛋白表達(dá)問題
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 問一下蛋白表達(dá)中出現(xiàn)的問題~
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 關(guān)于蛋白重組表達(dá)的問題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】酵母表達(dá)可溶性蛋白問題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】組氨酸標(biāo)記的蛋白表達(dá)活性問題
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】蛋白酶表達(dá)問題，求蛋白表達(dá)系統(tǒng)
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于綠色熒光蛋白表達(dá)問題
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】急！急！急！ his標(biāo)簽表達(dá)的蛋白出問題了，求指導(dǎo)�。�！
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】基因工程菌誘導(dǎo)蛋白表達(dá)的問題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于大腸桿菌中蛋白表達(dá)的問題
已經(jīng)有9人回復(fù)
lxj341401
至尊木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 58
- 應(yīng)助: 388 (碩士)
- 貴賓: 0.238
- 金幣: 17138.7
- 紅花: 43
- 帖子: 2251
- 在線: 712.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 111074
- 注冊: 2005-11-20
- 專業(yè): 生物化學(xué)
4樓2012-04-07 16:13:08
lxj341401
至尊木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 58
- 應(yīng)助: 388 (碩士)
- 貴賓: 0.238
- 金幣: 17138.7
- 紅花: 43
- 帖子: 2251
- 在線: 712.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 111074
- 注冊: 2005-11-20
- 專業(yè): 生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking: 金幣+3, 鼓勵(lì)發(fā)帖提供有幫助的信息！ 2012-04-07 19:03:18
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking: 金幣+3, 鼓勵(lì)發(fā)帖提供有幫助的信息！ 2012-04-07 19:03:18
|
共表達(dá)一般采用兩種方式，一種是直接選用共表達(dá)載體，然后把兩個(gè)蛋白基因克隆進(jìn)去；另外一種就是你說的方法，把兩個(gè)蛋白基因融合，共用啟動(dòng)子和終止子，在第一個(gè)蛋白終止密碼子和第二個(gè)蛋白起始密碼子中間加上RBS序列。 你的情況也沒說清楚，比如用的什么酶切位點(diǎn)，RBS和第二個(gè)起始密碼子的距離等，無法幫你分析為什么不表達(dá)。 |
2樓2012-04-07 13:41:41
|
我簡單的介紹一下采用的兩種方法同時(shí)表達(dá)兩種蛋白，用的是pET30a表達(dá)載體。方法一：T7啟動(dòng)子+蛋白A的起始密碼子，蛋白A的序列，蛋白的終止密碼子+RBS+蛋白B的起始密碼子，蛋白B的序列，蛋白B的終止密碼子。其中RBS和蛋白B的起始密碼子直接相連沒有其余序列。 這個(gè)方法只表達(dá)了RBS序列前的蛋白A，蛋白B沒有表達(dá)。 方法二：T7啟動(dòng)子+蛋白B的起始密碼子，蛋白B的序列，蛋白A的序列，蛋白A的終止密碼子。利用這種方法是表達(dá)了這種融合蛋白，但是測酶活發(fā)現(xiàn)活性很低。我表達(dá)蛋白最終是要測酶活的，酶活性太低是在說不過去。我想是不是這兩種蛋白這樣整合在一起，酶的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化，如酶的活性中心發(fā)生改變。現(xiàn)在我就比較傾向于方法一，只是還搞不明白蛋白B沒有表達(dá)。不知這樣算說明白了嗎？謝謝 |
3樓2012-04-07 15:40:05
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 101202139 的主題更新
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 有沒有道鐵/土木的想調(diào)劑南林，給自己招師弟中～ +3 | TqlXswl 2026-03-16 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +3 | 困于星晨 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工專碩調(diào)劑 +5 | heming3743 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +5 | Zz版 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 267一志愿南京工業(yè)大學(xué)0817化工求調(diào)劑 +6 | SUICHILD 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +7 | 小熊joy 2026-03-14 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)336分求調(diào)劑 +3 | zbzihdhd 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 機(jī)械專碩325，尋找調(diào)劑院校 +3 | y9999 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 070303一志愿西北大學(xué)學(xué)碩310找調(diào)劑 +5 | d如愿上岸 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 312求調(diào)劑 +3 | 陌宸希 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 中科大材料與化工319求調(diào)劑 +3 | 孟鑫材料 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +4 | 這么名字咋樣 2026-03-14 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 【0703化學(xué)調(diào)劑】-一志愿華中師范大學(xué)-六級(jí)475 +5 | Becho359 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 341求調(diào)劑 +4 | 番茄頭--- 2026-03-10 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿中科院，化學(xué)方向，295求調(diào)劑 +4 | 一氧二氮 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +9 | ADT 2026-03-11 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 【0856】化學(xué)工程（085602）313 分，本科學(xué)科評(píng)估A類院校化學(xué)工程與工藝，誠求調(diào)劑 +7 | 小劉快快上岸 2026-03-11 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +4 | 芬達(dá)46 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0856化學(xué)工程280分求調(diào)劑 +4 | shenzxsn 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +3 | 大口吃飯 身體健 2026-03-13 | 3/150 |
|