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crystalwby銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
核酸蛋白測定儀怎么感覺測得就是不準呢
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我是PAGE膠回收得到的一些DNA-buffer溶液，為了得到回收后的DNA濃度，我通過核酸蛋白測定儀來測定吸光度A，然后由朗伯比爾定律來進行計算。 回收后的DNA是溶解在100ulbuffer中的。 不同樣品各取5ul用buffer稀釋到100ul測得一組數據，每個樣品都是測量3次取平均值。但是在測量過程中發(fā)現測得值有飄移情況，我有7個樣品，其中6個的吸光度是小于0.1的。我后來查到說核酸蛋白測定儀在測得吸光度大于0.1時是準確的，于是我又重新取10ul回收液稀釋到50ul去測。按道理來說，第二次得到的值應該是第一次的4倍才符合我稀釋的濃度關系，但是大部分情況都不是這樣。 比如： 0.047----0.063 0.085----0.222 0.121----0.319 0.045----0.085 0.047----0.089 0.083----0.153 這種結果讓我很郁悶，而且之前采用5ul稀釋到100ul時我測過幾次，每次結果都相差挺大的。 如果0.222/0.319/0.153這種結果是準確的，那考慮到10ul稀釋到50ul的稀釋倍數，我計算得到的濃度那也太低了吧，不合常理啊。。。 這是儀器的問題嗎？有沒有辦法避免呢。。。？ PS. 空白blank是我用的buffer，比色皿里面沒有氣泡，溶液混勻了 [ Last edited by crystalwby on 2013-3-7 at 11:09 ] |
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