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guxiao1990新蟲 (初入文壇)
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[求助]
轉(zhuǎn)錄組測序所需RNA提取
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| 各位大神，我現(xiàn)在要做西蘭花轉(zhuǎn)錄組測序，需要自己提RNA，要求質(zhì)量很高，提的總是達(dá)不到要求，而且貌似雜質(zhì)很多，有沒有什么好的方法解決，或者好的試劑盒？謝謝了哈~ |
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gaoyang636
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5樓2013-03-12 08:34:10
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8樓2013-03-12 17:57:28
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10樓2013-06-30 08:58:45
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2樓2013-03-09 14:56:50
guxiao1990
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這兩張圖是兩次做的，第一張從左到右是marker，擬南芥RNA，西蘭花RNA；第二章從右到左是marker，西蘭花RNA，擬南芥RNA。 擬南芥的兩次都有帶，就是帶不亮，但是西蘭花的基本就看不到帶，第二次的還特別亮一大堆不知道是什么東西。 提取步驟： 1.50-100mg加1ml trizol勻漿器研磨，室溫靜置5min； 2.加0.2ml氯仿，劇烈搖晃15s，室溫靜置5min，12000rmp4度離心5min； 3.取上層水相轉(zhuǎn)入新EP管，加入0.5ml異丙醇，混勻放于-20度1h，12000rmp離心10min； 4.倒掉上清，加現(xiàn)配預(yù)冷1ml75%乙醇震蕩洗滌一次，7500rmp離心5min； 5.倒掉上清，晾干，加20uldepc水溶解。 麻煩您分析下到底是什么問題。。。。。 rna 2013 3 6.jpg rna 2013 3 8.jpg |
3樓2013-03-11 14:05:09
ahnuzc
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