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[求助] 提取RNA后，反轉(zhuǎn)錄后用β-actinpcr很多條帶

反轉(zhuǎn)錄很多次，用的是takara的反轉(zhuǎn)錄試劑盒。用β-actin都沒(méi)p出來(lái)。β-actinpcr后條帶很多，在目的條帶處陰性對(duì)照跟基因組dna都pcr出來(lái)了。很是郁悶，請(qǐng)各位蟲(chóng)友幫忙解決~~

這是我提的rna

這是我β-actin的結(jié)果，第一個(gè)是陰性沒(méi)加反轉(zhuǎn)錄酶的rna。β-actin產(chǎn)物在c

[ Last edited by 上官慧 on 2012-5-17 at 09:26 ]

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1樓 2012-05-17 09:18:52

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actin出那么多帶可能是你的引物特異性不好，或者是不是你的模版被污染了��？還有你的說(shuō)明不是很明白，按理說(shuō)陰性的話應(yīng)該是沒(méi)有帶的，你的卻出帶了，很有可能是你的模版被污染了！

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2樓2012-05-17 10:02:18

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上官慧

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2樓: Originally posted by friya0910 at 2012-05-17 10:02:18:
actin出那么多帶可能是你的引物特異性不好，或者是不是你的模版被污染了�。窟€有你的說(shuō)明不是很明白，按理說(shuō)陰性的話應(yīng)該是沒(méi)有帶的，你的卻出帶了，很有可能是你的模版被污染了！

是幾次反轉(zhuǎn)錄的cDNA用作模板都是這個(gè)結(jié)果，目標(biāo)條帶是211bp，用的marker是DL500.模板是翻轉(zhuǎn)后就用了，按說(shuō)也沒(méi)什么機(jī)會(huì)污染的。

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3樓2012-05-17 10:12:02

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3樓: Originally posted by 上官慧 at 2012-05-17 10:12:02:
是幾次反轉(zhuǎn)錄的cDNA用作模板都是這個(gè)結(jié)果，目標(biāo)條帶是211bp，用的marker是DL500.模板是翻轉(zhuǎn)后就用了，按說(shuō)也沒(méi)什么機(jī)會(huì)污染的。

Marker最亮的帶是多大啊？

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4樓2012-05-17 10:29:16

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4樓: Originally posted by friya0910 at 2012-05-17 10:29:16:
Marker最亮的帶是多大��？

是200

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5樓2012-05-17 10:39:36

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5樓: Originally posted by 上官慧 at 2012-05-17 10:39:36:
是200

其實(shí)我還是部太能看明白你的描述，你所有的孔都是用actin的引物P的嗎？還是也用了你的目的基因的引物��？

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6樓2012-05-17 10:44:19

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6樓: Originally posted by friya0910 at 2012-05-17 10:44:19:
其實(shí)我還是部太能看明白你的描述，你所有的孔都是用actin的引物P的嗎？還是也用了你的目的基因的引物啊？

只用的是actin的引物p的

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7樓2012-05-17 11:08:04

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gaoyang636

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反轉(zhuǎn)錄結(jié)束后定量了沒(méi)有？
稀釋了多少倍做的模板？

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8樓2012-05-17 12:02:03

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8樓: Originally posted by gaoyang636 at 2012-05-17 12:02:03:
反轉(zhuǎn)錄結(jié)束后定量了沒(méi)有？
稀釋了多少倍做的模板？

反轉(zhuǎn)錄之后沒(méi)有定量，應(yīng)該怎么定量呢？50ul的體系，加1ul的模板。模板濃度0.1ug/ul

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9樓2012-05-17 12:07:23

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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-05-17 14:41:23

我大概明白了你的意思了，你的第一條亮帶就是在marker200的那個(gè)應(yīng)該就是你的目的帶啊，其它的應(yīng)該是非特異性擴(kuò)增，最下面糊的那條是引物二聚體，你這不叫沒(méi)P出來(lái)，你這明明就是P出來(lái)了啊，只是引物特意性不好，至于你說(shuō)的陰性對(duì)照，我覺(jué)得一般沒(méi)有像你這樣設(shè)的吧，一般是不加模版P一下吧！希望對(duì)您有幫助。

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10樓2012-05-17 13:28:35

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