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[交流]
【求助/交流】細(xì)菌總RNA的提取和RT-PCR
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1.第一次做細(xì)菌總RNA的提取,很擔(dān)心RNA會(huì)降解,請(qǐng)問(wèn)需要注意哪些? (菌體培養(yǎng)階段所用的器皿,槍頭需要DEPC水浸泡嗎,還是從菌體離心開(kāi)始提取RNA時(shí)才要求所有東西要RNase-free?) 2.我只要檢測(cè)RNA的轉(zhuǎn)錄情況,只需要反轉(zhuǎn)錄成CDNA的第一鏈,幫忙推薦下RT-PCR試劑盒,哪個(gè)公司的好用? [ Last edited by tutufei on 2011-3-2 at 18:20 ] |
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銀蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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注意事項(xiàng)比較多,從提取階段開(kāi)始,培養(yǎng)階段正常就行。所有槍頭,離心管都要用DEPC水浸泡,滅菌。如果要做電泳,電泳槽也用DEPC水浸泡一下更好。 如果只要第一鏈,那用兩步法就行,我當(dāng)時(shí)用的是PROMIGA公司的逆轉(zhuǎn)錄酶,而且沒(méi)用試劑盒,DIY。效果不錯(cuò)。 |
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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簡(jiǎn)單說(shuō)說(shuō)我的一點(diǎn)兒建議吧 首先菌體培養(yǎng)很重要,一定要做了種子液,菌體狀態(tài)不好RNA肯定質(zhì)量不高; 關(guān)于提取的器皿什么的玻璃的180度烘烤,槍頭離心管各種試劑之類的用新開(kāi)口的,把槍頭盒什么的用酒精好好擦擦,即使國(guó)產(chǎn)也可以湊合用,用DEPC水泡過(guò)滅菌當(dāng)然更好~~ 提取過(guò)程中保證環(huán)境的清潔,少說(shuō)話,最好戴個(gè)口罩吧,手套建議用橡膠手套,一次性的用著太不方便,反而容易污染~離心機(jī)最好放在自己實(shí)驗(yàn)的臺(tái)子上,接觸離心管的部位大概擦擦,也為了預(yù)防吧~ 在離心管開(kāi)關(guān)口的過(guò)程小心,避免手接觸到管口,防止有雜物落入~~自己試著提幾次,熟就好了,沒(méi)有想象的那么困難,如果不是完全定量的部分講解也是可以接受的~~ 我沒(méi)怎么用試劑盒,RNA提取,DNA消化、反轉(zhuǎn)都是自己弄的,沒(méi)用試劑盒,你可以根據(jù)自己需要對(duì)比一下~ 希望這些對(duì)你有用 |
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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