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[交流]
【求助/交流】細菌總RNA的提取和RT-PCR
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1.第一次做細菌總RNA的提取，很擔心RNA會降解，請問需要注意哪些？ （菌體培養(yǎng)階段所用的器皿，槍頭需要DEPC水浸泡嗎，還是從菌體離心開始提取RNA時才要求所有東西要RNase-free？） 2.我只要檢測RNA的轉(zhuǎn)錄情況，只需要反轉(zhuǎn)錄成CDNA的第一鏈，幫忙推薦下RT-PCR試劑盒，哪個公司的好用？ [ Last edited by tutufei on 2011-3-2 at 18:20 ] |
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3樓2011-03-02 21:23:00
4樓2011-03-02 23:11:23
★ ★ ★ ★
lstt09nk(金幣+4): 鼓勵新蟲交流，歡迎常來 2011-03-03 16:51:06
tutufei(金幣+10): 很詳細，謝謝 2011-03-12 11:40:17
lstt09nk(金幣+4): 鼓勵新蟲交流，歡迎常來 2011-03-03 16:51:06
tutufei(金幣+10): 很詳細，謝謝 2011-03-12 11:40:17
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簡單說說我的一點兒建議吧 首先菌體培養(yǎng)很重要，一定要做了種子液，菌體狀態(tài)不好RNA肯定質(zhì)量不高； 關于提取的器皿什么的玻璃的180度烘烤，槍頭離心管各種試劑之類的用新開口的，把槍頭盒什么的用酒精好好擦擦，即使國產(chǎn)也可以湊合用，用DEPC水泡過滅菌當然更好~~ 提取過程中保證環(huán)境的清潔，少說話，最好戴個口罩吧，手套建議用橡膠手套，一次性的用著太不方便，反而容易污染~離心機最好放在自己實驗的臺子上，接觸離心管的部位大概擦擦，也為了預防吧~ 在離心管開關口的過程小心，避免手接觸到管口，防止有雜物落入~~自己試著提幾次，熟就好了，沒有想象的那么困難，如果不是完全定量的部分講解也是可以接受的~~ 我沒怎么用試劑盒，RNA提取，DNA消化、反轉(zhuǎn)都是自己弄的，沒用試劑盒，你可以根據(jù)自己需要對比一下~ 希望這些對你有用 |
5樓2011-03-03 14:23:01
6樓2011-03-04 19:35:47
7樓2011-03-04 19:36:50
8樓2011-03-05 10:07:10
簡單回復
劉俊俊19889樓
2012-04-26 16:52
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