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[交流]
【求助/交流】細(xì)菌總RNA的提取和RT-PCR
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1.第一次做細(xì)菌總RNA的提取，很擔(dān)心RNA會(huì)降解，請問需要注意哪些？ （菌體培養(yǎng)階段所用的器皿，槍頭需要DEPC水浸泡嗎，還是從菌體離心開始提取RNA時(shí)才要求所有東西要RNase-free？） 2.我只要檢測RNA的轉(zhuǎn)錄情況，只需要反轉(zhuǎn)錄成CDNA的第一鏈，幫忙推薦下RT-PCR試劑盒，哪個(gè)公司的好用？ [ Last edited by tutufei on 2011-3-2 at 18:20 ] |
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4樓2011-03-02 23:11:23
★ ★ ★
lstt09nk(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2011-03-02 18:48:44
翱宇(金幣+1): 鼓勵(lì)交流！ 2011-03-05 14:58:55
tutufei(金幣+3): 謝謝 2011-03-12 11:37:13
lstt09nk(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2011-03-02 18:48:44
翱宇(金幣+1): 鼓勵(lì)交流！ 2011-03-05 14:58:55
tutufei(金幣+3): 謝謝 2011-03-12 11:37:13
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注意事項(xiàng)比較多，從提取階段開始，培養(yǎng)階段正常就行。所有槍頭，離心管都要用DEPC水浸泡，滅菌。如果要做電泳，電泳槽也用DEPC水浸泡一下更好。 如果只要第一鏈，那用兩步法就行，我當(dāng)時(shí)用的是PROMIGA公司的逆轉(zhuǎn)錄酶，而且沒用試劑盒，DIY。效果不錯(cuò)。 |
2樓2011-03-02 18:23:25
3樓2011-03-02 21:23:00
★ ★ ★ ★
lstt09nk(金幣+4): 鼓勵(lì)新蟲交流，歡迎常來 2011-03-03 16:51:06
tutufei(金幣+10): 很詳細(xì)，謝謝 2011-03-12 11:40:17
lstt09nk(金幣+4): 鼓勵(lì)新蟲交流，歡迎常來 2011-03-03 16:51:06
tutufei(金幣+10): 很詳細(xì)，謝謝 2011-03-12 11:40:17
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簡單說說我的一點(diǎn)兒建議吧 首先菌體培養(yǎng)很重要，一定要做了種子液，菌體狀態(tài)不好RNA肯定質(zhì)量不高； 關(guān)于提取的器皿什么的玻璃的180度烘烤，槍頭離心管各種試劑之類的用新開口的，把槍頭盒什么的用酒精好好擦擦，即使國產(chǎn)也可以湊合用，用DEPC水泡過滅菌當(dāng)然更好~~ 提取過程中保證環(huán)境的清潔，少說話，最好戴個(gè)口罩吧，手套建議用橡膠手套，一次性的用著太不方便，反而容易污染~離心機(jī)最好放在自己實(shí)驗(yàn)的臺子上，接觸離心管的部位大概擦擦，也為了預(yù)防吧~ 在離心管開關(guān)口的過程小心，避免手接觸到管口，防止有雜物落入~~自己試著提幾次，熟就好了，沒有想象的那么困難，如果不是完全定量的部分講解也是可以接受的~~ 我沒怎么用試劑盒，RNA提取，DNA消化、反轉(zhuǎn)都是自己弄的，沒用試劑盒，你可以根據(jù)自己需要對比一下~ 希望這些對你有用 |
5樓2011-03-03 14:23:01
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