 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (1638)
- >考研 (248)
- >導(dǎo)師招生 (160)
- >基金申請(qǐng) (32)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (18)
- >考博 (16)
- >休閑灌水 (16)
- >碩博家園 (12)
- >博后之家 (8)
- >論文道賀祈福 (5)
- >招聘信息布告欄 (4)
- >文獻(xiàn)求助 (4)
- >教師之家 (3)
- >找工作 (3)
- >復(fù)合材料 (2)
- >學(xué)術(shù)會(huì)議 (2)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 857 | 回復(fù): 3 | |||
[交流]
求經(jīng)驗(yàn)：水不溶的樣品如何能做好反相C18純化？ 已有1人參與
|
|
最近遇到一個(gè)問(wèn)題和大家討論下。手頭正在做一個(gè)項(xiàng)目，樣品（暫叫做A吧）在水中幾乎一點(diǎn)不溶解，但是據(jù)一些渠道了解到，這個(gè)在純化工藝中是有RPHPLC這一步的。等度C18分析柱上主峰保留時(shí)間約20min，雜質(zhì)保留時(shí)間約23min。 1. 現(xiàn)在已知A在純甲醇中溶解度能到400mg/ml，在50%甲醇中溶解度僅為4mg/ml 2. A樣在純DMSO溶解度約為200mg/ml，在50%DMSO中溶解度能到100mg/ml，在25%DMSO中溶解度能到50mg/ml。 3. 在做C18柱純化時(shí)，用20%乙腈-buffer平衡，37%乙腈-buffer等度洗脫約10個(gè)柱體積時(shí)主峰開(kāi)始出峰。上樣時(shí)已經(jīng)嘗試了樣品用純DMSO溶解、25%DMSO-水溶解，上樣體積均為0.5ml（柱體積40ml），結(jié)果均感覺(jué)峰展寬嚴(yán)重，主峰后的雜質(zhì)分不掉。 針對(duì)上述情況，大俠們有什么好的建議嗎？碰到這種水不溶樣品做反相純化時(shí)大伙是怎么解決的呢？？？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
如何高效的測(cè)量腺病毒的粒徑和電位
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
26在職申博—生物與醫(yī)藥—抗體/ADC藥物方向，江浙滬，有項(xiàng)目，可帶資。
已經(jīng)有1人回復(fù)
-
藥物學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有161人回復(fù)
-
288分求調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
一志愿蘇州大學(xué) 生物技術(shù)與工程（086001） 初試323分，求調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
三年實(shí)驗(yàn)室工作經(jīng)歷，一志愿華中農(nóng)業(yè)大學(xué)微生物，總分288求調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 重金求食品添加劑中焦糖色素異型物與水不溶物的檢測(cè)方法
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助】求助反相硅膠柱上樣前樣品預(yù)處理
已經(jīng)有8人回復(fù)
huaqiangliu
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 66 (初中生)
- 金幣: 1124.3
- 紅花: 3
- 帖子: 144
- 在線: 84.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2289755
- 注冊(cè): 2013-02-20
- 專業(yè): 化學(xué)生物學(xué)與生物有機(jī)化學(xué)
★ ★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
marktiger: 金幣+1, 謝謝參與 2013-03-13 15:59:05
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
marktiger: 金幣+1, 謝謝參與 2013-03-13 15:59:05
|
RPHPLC只是一種方法，里面可以裝很多種填料 只要是反向的填料都叫RPHPLC，主峰保留時(shí)間約20min，雜質(zhì)保留時(shí)間約23min，這個(gè)用于分析的話能分開(kāi)，你制備將其分開(kāi)一點(diǎn)問(wèn)題都沒(méi)有，并且上樣量應(yīng)該還比較大，但是問(wèn)題我感覺(jué)出在你的上樣量或者你的制備柱的裝填高度上，如果你是半制備那就拉倒了，你改變不了柱子高度，你如果有DAC，那就裝的再高點(diǎn)，要么你就用純甲醇上樣少點(diǎn)試一下，流動(dòng)向改成甲醇低濃度先沖。 再就是我看你這個(gè)流動(dòng)向的配比，你完全可以用反向?qū)游鰳?shù)脂代替C18柱，分開(kāi)是沒(méi)有問(wèn)題的，關(guān)鍵是這個(gè)填料可以裝填很高，不容易污染。我們?cè)瓉?lái)有個(gè)項(xiàng)目就是用的高壓制備，向在改為這種樹(shù)脂了，國(guó)產(chǎn)的還便宜1L也就2000左右。 |
2樓2013-03-13 10:07:24
|
非常感謝您的回復(fù)。關(guān)于RPHPLC，我現(xiàn)在正在嘗試C18或聚合物基質(zhì)的反向微球兩種填料。至于別的C8、C4基本可以排除。 針對(duì)您的回復(fù)，有些疑問(wèn)進(jìn)一步請(qǐng)教您： 1，“你完全可以用反向?qū)游鰳?shù)脂代替C18柱，分開(kāi)是沒(méi)有問(wèn)題的，關(guān)鍵是這個(gè)填料可以裝填很高，不容易污染�！边@其中說(shuō)的反向?qū)游鰳?shù)脂是什么？有沒(méi)有具體的關(guān)于廠家、型號(hào)、特性等資料介紹？ 2，用純甲醇溶解進(jìn)樣，會(huì)不會(huì)造成上樣時(shí)候峰就展寬？ 另外，這兩天的試驗(yàn)我發(fā)現(xiàn)一個(gè)問(wèn)題，原來(lái)是用20%乙腈-buffer平衡，37%乙腈-buffer等度洗脫。如果改為甲醇-水體系洗脫時(shí)，約在65%甲醇-水時(shí)出峰。因而我用的是30%甲醇-水平衡的。平衡后在上DMSO溶解的樣品時(shí)，觀察到進(jìn)樣管路中出現(xiàn)渾濁，推測(cè)是樣品析出了（可能在用乙腈-水體系時(shí)也有析出，只是沒(méi)有觀察到），故進(jìn)一步推測(cè)分離度不好的原因會(huì)不會(huì)是這種析出造成的？ |
3樓2013-03-13 15:31:31
huaqiangliu
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 66 (初中生)
- 金幣: 1124.3
- 紅花: 3
- 帖子: 144
- 在線: 84.9小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 2289755
- 注冊(cè): 2013-02-20
- 專業(yè): 化學(xué)生物學(xué)與生物有機(jī)化學(xué)
★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
|
1、我用過(guò)反向?qū)游鰳?shù)脂是SKP-10-4300，對(duì)我們這個(gè)產(chǎn)品效果很好。濟(jì)南博納生物的，用的挺好的現(xiàn)在已經(jīng)重復(fù)300多批次了，重現(xiàn)性挺好的。具體怎么用你得問(wèn)他們廠家，再就是你得根據(jù)你要分離 物的性質(zhì)大小選擇填料，你問(wèn)他們更好，他們經(jīng)驗(yàn)還是有的。 2、你先用甲醇上樣試一下阿，因?yàn)槟銟悠芬兹苡诩状疾抛屇阌眉状荚嚨�，我原�?lái)這樣干過(guò)。 3、如果有析出那就不好，肯定吸附在柱頭上，然后洗托的時(shí)候一點(diǎn)一點(diǎn)的洗下來(lái)，就造成譜帶變寬，收率變低，柱子污染嚴(yán)重咯。 |
4樓2013-03-14 08:32:48
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 mycine 的主題更新
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 08工科 320總分 求調(diào)劑 +6 | 梨花珞晚風(fēng) 2026-03-17 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 材料專碩英一數(shù)二306 +7 | z1z2z3879 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +9 | 何潤(rùn)采123 2026-03-18 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +5 | @taotao 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)]
學(xué)校已經(jīng)提交到NSFC，還能修改嗎？
 40+4
|
babangida 2026-03-19 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 暗涌afhb 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿中國(guó)海洋大學(xué)，生物學(xué)，301分，求調(diào)劑 +5 | 1孫悟空 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +4 | z1z2z3879 2026-03-14 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085601材料工程專碩求調(diào)劑 +10 | 慕寒mio 2026-03-16 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑，英語(yǔ)六級(jí)551，有科研經(jīng)歷 +4 | 生物工程調(diào)劑 2026-03-16 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +10 | 呼呼呼。。。。 2026-03-17 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 312求調(diào)劑 +8 | 陌宸希 2026-03-16 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料，紡織，生物（0856、0710），化學(xué)招生啦 +3 | Eember. 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考博] 26博士申請(qǐng) +3 | 1042136743 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[碩博家園] 湖北工業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)與健康學(xué)院-課題組招收2026級(jí)食品/生物方向碩士 +3 | 1喜春8 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 11408 一志愿西電，277分求調(diào)劑
+3
|
zhouzhen654 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] [導(dǎo)師推薦]西南科技大學(xué)國(guó)防/材料導(dǎo)師推薦 +3 | 尖角小荷 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +4 | 諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)覬?/a> 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 277材料科學(xué)與工程080500求調(diào)劑 +3 | 自由煎餅果子 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085601材料工程315分求調(diào)劑 +3 | yang_0104 2026-03-15 | 3/150 |
|