 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 858 | 回復: 3 | |||
[交流]
求經(jīng)驗：水不溶的樣品如何能做好反相C18純化？ 已有1人參與
|
|
最近遇到一個問題和大家討論下。手頭正在做一個項目，樣品（暫叫做A吧）在水中幾乎一點不溶解，但是據(jù)一些渠道了解到，這個在純化工藝中是有RPHPLC這一步的。等度C18分析柱上主峰保留時間約20min，雜質保留時間約23min。 1. 現(xiàn)在已知A在純甲醇中溶解度能到400mg/ml，在50%甲醇中溶解度僅為4mg/ml 2. A樣在純DMSO溶解度約為200mg/ml，在50%DMSO中溶解度能到100mg/ml，在25%DMSO中溶解度能到50mg/ml。 3. 在做C18柱純化時，用20%乙腈-buffer平衡，37%乙腈-buffer等度洗脫約10個柱體積時主峰開始出峰。上樣時已經(jīng)嘗試了樣品用純DMSO溶解、25%DMSO-水溶解，上樣體積均為0.5ml（柱體積40ml），結果均感覺峰展寬嚴重，主峰后的雜質分不掉。 針對上述情況，大俠們有什么好的建議嗎？碰到這種水不溶樣品做反相純化時大伙是怎么解決的呢？？？ |
回復此樓» 猜你喜歡
藥學學碩326求調劑
已經(jīng)有1人回復
-
105500藥學調劑，一志愿頂9，主持省級大創(chuàng)，實驗型SCI二作，四六級已過，雙國獎
已經(jīng)有6人回復
-
藥物學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有152人回復
-
藥理學、臨床藥學方向 調劑
已經(jīng)有1人回復
-
藥學專碩調劑
已經(jīng)有0人回復
-
publcif的使用
已經(jīng)有0人回復
-
求調劑
已經(jīng)有2人回復
-
會計專碩求調劑
已經(jīng)有0人回復
-
新加坡國立大學藥學系化學生物學課題組招PhD
已經(jīng)有14人回復
-
請教酰胺縮合反應
已經(jīng)有2人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 重金求食品添加劑中焦糖色素異型物與水不溶物的檢測方法
已經(jīng)有8人回復
- 【求助】求助反相硅膠柱上樣前樣品預處理
已經(jīng)有8人回復
huaqiangliu
新蟲 (小有名氣)
- 應助: 66 (初中生)
- 金幣: 1124.3
- 紅花: 3
- 帖子: 144
- 在線: 84.9小時
- 蟲號: 2289755
- 注冊: 2013-02-20
- 專業(yè): 化學生物學與生物有機化學
★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
marktiger: 金幣+1, 謝謝參與 2013-03-13 15:59:05
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
marktiger: 金幣+1, 謝謝參與 2013-03-13 15:59:05
|
RPHPLC只是一種方法，里面可以裝很多種填料 只要是反向的填料都叫RPHPLC，主峰保留時間約20min，雜質保留時間約23min，這個用于分析的話能分開，你制備將其分開一點問題都沒有，并且上樣量應該還比較大，但是問題我感覺出在你的上樣量或者你的制備柱的裝填高度上，如果你是半制備那就拉倒了，你改變不了柱子高度，你如果有DAC，那就裝的再高點，要么你就用純甲醇上樣少點試一下，流動向改成甲醇低濃度先沖。 再就是我看你這個流動向的配比，你完全可以用反向層析樹脂代替C18柱，分開是沒有問題的，關鍵是這個填料可以裝填很高，不容易污染。我們原來有個項目就是用的高壓制備，向在改為這種樹脂了，國產的還便宜1L也就2000左右。 |
2樓2013-03-13 10:07:24
|
非常感謝您的回復。關于RPHPLC，我現(xiàn)在正在嘗試C18或聚合物基質的反向微球兩種填料。至于別的C8、C4基本可以排除。 針對您的回復，有些疑問進一步請教您： 1，“你完全可以用反向層析樹脂代替C18柱，分開是沒有問題的，關鍵是這個填料可以裝填很高，不容易污染�！边@其中說的反向層析樹脂是什么？有沒有具體的關于廠家、型號、特性等資料介紹？ 2，用純甲醇溶解進樣，會不會造成上樣時候峰就展寬？ 另外，這兩天的試驗我發(fā)現(xiàn)一個問題，原來是用20%乙腈-buffer平衡，37%乙腈-buffer等度洗脫。如果改為甲醇-水體系洗脫時，約在65%甲醇-水時出峰。因而我用的是30%甲醇-水平衡的。平衡后在上DMSO溶解的樣品時，觀察到進樣管路中出現(xiàn)渾濁，推測是樣品析出了（可能在用乙腈-水體系時也有析出，只是沒有觀察到），故進一步推測分離度不好的原因會不會是這種析出造成的？ |
3樓2013-03-13 15:31:31
huaqiangliu
新蟲 (小有名氣)
- 應助: 66 (初中生)
- 金幣: 1124.3
- 紅花: 3
- 帖子: 144
- 在線: 84.9小時
- 蟲號: 2289755
- 注冊: 2013-02-20
- 專業(yè): 化學生物學與生物有機化學
4樓2013-03-14 08:32:48
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 mycine 的主題更新
| 4 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 資源與環(huán)境 調劑申請(333分) +5 | holy J 2026-03-21 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 材料求調劑 +5 | @taotao 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿深大，0703化學，總分302，求調劑 +4 | 七月-七七 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
[考研] 277材料科學與工程080500求調劑 +6 | 自由煎餅果子 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 生物學一志愿985，分數(shù)349求調劑 +3 | zxts12 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 265求調劑 +3 | Jack?k?y 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 328求調劑，英語六級551，有科研經(jīng)歷 +4 | 生物工程調劑 2026-03-17 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 材料專業(yè)求調劑 +6 | hanamiko 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 296求調劑 +6 | www_q 2026-03-18 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 北科281學碩材料求調劑 +5 | tcxiaoxx 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調劑 +3 | eation27 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 工科材料085601 279求調劑 +7 | 困于星晨 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 材料學碩318求調劑 +5 | February_Feb 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工求調劑 +6 | 緒幸與子 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 328求調劑，英語六級551，有科研經(jīng)歷 +4 | 生物工程調劑 2026-03-16 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 【同濟軟件】軟件（085405）考研求調劑 +3 | 2026eternal 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085601專碩，總分342求調劑，地區(qū)不限 +5 | share_joy 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 考研求調劑 +3 | 橘頌. 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 326求調劑 +5 | 上岸的小葡 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 275求調劑 +4 | 太陽花天天開心 2026-03-16 | 4/200 |
|