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hylee103金蟲 (正式寫手)
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LAMP相關(guān)問題求助 已有2人參與
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| 最近在做病毒的lamp檢測(cè)，原模板濃度為0.2ug/ul,將模板10倍稀釋，稀釋到10 -21時(shí)，還可以檢測(cè)到，是不是出現(xiàn)假陽性了？該怎么避免假陽性現(xiàn)象呢？求大家多多指導(dǎo)！ |
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 分子生化實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)積累 | 核酸生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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【答案】應(yīng)助回帖
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gyesang: 回帖置頂 2013-05-03 00:26:05
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gyesang: 回帖置頂 2013-05-03 00:26:05
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假陽性可以通過NTC（No Template Control）做測(cè)試 一般的LAMP實(shí)驗(yàn)?zāi)茏龅?0-100copies/reaction,,,運(yùn)氣好的時(shí)候設(shè)計(jì)的引物能到個(gè)位數(shù) 不過個(gè)位數(shù)copy的檢出需要重復(fù)，并計(jì)算95%檢出率的置信區(qū)間 總的來說，LAMP極其容易出現(xiàn)假陽性，所以一旦出現(xiàn)，必須更換引物、試劑，引物尤其是FIP、BIP最好是HPLC純化的 |
6樓2013-04-30 23:20:48
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LAMP的FIP、BIP極易出現(xiàn)引物二聚體，這個(gè)正常 都能P出來，那你得看看是不是以下問題： 1.FIP、BIP中的F1c、B1c那個(gè)方向?qū)Σ粚?duì)---如果是primer explorer設(shè)計(jì)的話不會(huì)錯(cuò)，手工設(shè)計(jì)的時(shí)候有時(shí)候會(huì)粗心 2.有沒有在反應(yīng)中使用loop引物---有時(shí)候設(shè)計(jì)不理想，靈敏度會(huì)很低，這時(shí)候往往需要通過延長反應(yīng)時(shí)間或者添加loop引物 3.反應(yīng)體系是自配還是試劑盒，如果自配的不好就可以試試試劑盒，國產(chǎn)的比鬼子的便宜不少 4.以上都不行，那啥你就換一套吧，這個(gè)真沒轍了 |
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dh_36907588113樓2013-05-03 00:15:00
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很簡單，用你設(shè)計(jì)的外引物F3、B3直接去做PCR or RT-PCR 靈敏度雖然不一定比得上LAMP，但是相差也不會(huì)太多 同樣道理，內(nèi)引物FIP、BIP也可以類似測(cè)試---如果F2-B2之間間隔太小，擴(kuò)增產(chǎn)物不好與引物二聚體區(qū)分，可以用FIP和B3、BIP和F3來分別做個(gè)測(cè)試 也就是半天時(shí)間，測(cè)試完了就都知道了 |
7樓2013-04-30 23:25:16
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2樓2013-03-19 07:53:42
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12樓2013-05-02 16:30:42
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3樓2013-04-28 15:27:08
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4樓2013-04-29 12:08:27
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5樓2013-04-30 11:54:26
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