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[求助]
毛狀根DNA的提取
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求助�。。。。。。。�！ 現(xiàn)在在做東南景天的毛狀根誘導(dǎo)，按照CTAB法的試劑盒提取，死活提取不出來毛狀根的DNA啊�。。�！ 文獻上報道說SDS和CTAB法都可以提出出來，為毛我的就提取不出來呢？？？ 蟲友們幫我啊。。。�？�。。。。。  |
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2樓2013-03-20 19:24:46
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3樓2013-03-21 16:54:03
送鮮花一朵 |
是這樣的： 1.取毛狀根0.5g（因為我的毛狀根長的不好，所以原料很少，各位有什么好辦法令毛狀根長勢好一些么？），液氮研磨至粉末。 2.轉(zhuǎn)移細粉到一個1.5ml離心管，不解凍，加600μl 65℃預(yù)熱的裂解液PL (加入β-巰基乙醇至2%)，劇烈渦旋振蕩混勻，用大口徑槍頭輕柔吹打幫助裂解，加入6μl RNA酶（20mg/ml）。 3.65℃水浴30分鐘，在水浴過程中顛倒離心管以混合樣品數(shù)次。 4.用等體積酚/氯仿（1：1）抽提一遍。 5.加入700μl氯仿/異戊醇（體積比24：1混合），顛倒充分混勻幾分鐘，13,000rpm 離心5分鐘。 6.小心吸取上清到新的1.5ml離心管。如上清比較渾濁，則需要重復(fù)步驟4一遍，直到得到透亮上清。 7.加入1.5倍體積結(jié)合液PQ （已加入無水乙醇）后立刻渦旋，充分混勻。 8.將上一步所得混合物（包括可能出現(xiàn)的沉淀）加入吸附柱AC中，13,000rpm離心30秒，倒掉收集管中的廢液。 8. 加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm 離心30秒，棄廢液。 9. 加入700μl漂洗液WB（已加入無水乙醇），12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。 10. 加入500μl漂洗液WB，12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。 11. 將吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm離心2分鐘，除去漂洗液。 12. 取出吸附柱AC，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加100μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 65℃水浴中預(yù)熱），室溫放置3-5分鐘，12,000rpm 離心1分鐘。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2分鐘，12,000rpm離心1分鐘。 就這樣，用的試劑公司的試劑盒，買過兩次，康為的和艾德萊公司，植物CTAB法提取試劑盒，提過N次還是提不出來。。。 要哭了。。。 |
4樓2013-03-21 21:34:54
5樓2013-03-21 21:36:41
starseacow
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
Bella0224: 金幣+3, ★★★很有幫助 2013-03-22 15:19:07
Bella0224: 金幣+3, ★★★很有幫助 2013-03-22 15:19:07
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1 關(guān)于發(fā)根怎樣加快生長，可以對培養(yǎng)條件進行優(yōu)化，入手方向包括培養(yǎng)基，溫度，光照，轉(zhuǎn)速，培養(yǎng)瓶裝液量等等 2 樓主貼的方法應(yīng)該是直接參照試劑盒的吧，我做試劑都是自己配的，一般不用試劑盒（有時候試劑盒吹得很厲害，但很可能只是對特定某些植物材料效果比較好，使用試劑盒不太好自己調(diào)整摸索）。你的問題一方面我感覺可能是植物材料裂解不完全，試試延長65度處理時間，酚氯仿抽提步驟也不要重復(fù)太多次。此外，接下來先不用吸附柱，可以換成傳統(tǒng)CTAB法的處理步驟試試，看能否獲得DNA。 |
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6樓2013-03-22 05:39:58
紫眸玉兒
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