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monazhou001新蟲(chóng) (初入文壇)
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求助！實(shí)時(shí)定量PCR所有CT值都是undetermined，熔解曲線(xiàn)可以做出來(lái)
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是不是cDNA濃度太高了呢？之前普通PCR其實(shí)用的濃度更高，大概一千多ng,20體系加了2微升可以出目標(biāo)條帶 做qPCR這回稀釋了六倍，200ng每微升，20體系加了1微升 做出來(lái)所有CT都是無(wú)法識(shí)別的，溶解曲線(xiàn)應(yīng)該沒(méi)有什么問(wèn)題看起來(lái)。。 可是也做了一下梯度五倍五倍的梯度，做了五個(gè)，沒(méi)有一個(gè)出CT值的 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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monazhou001: 金幣+12, ★★★很有幫助, 非常感謝 2013-03-22 18:12:47
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我做了兩次。。。兩次都是同一個(gè)基因沒(méi)有檢測(cè)出來(lái)。。ＣＴ值那張圖也沒(méi)有任何峰。模板第一次用的是２ｕｌ。第二次我就只加了１ｕｌ，可是還是不能檢測(cè)出來(lái)，我在懷疑是不是這個(gè)基因本身的表達(dá)就很低，所以檢測(cè)不出來(lái)，我反倒認(rèn)為是模板量太少了。。你認(rèn)為呢？ |
7樓2013-03-22 09:00:43
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9樓2013-03-22 10:31:06
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