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刀巴廣林鬼木蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
有關(guān)脫氧核糖的羥自由基清除實(shí)驗(yàn)的問(wèn)題
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本人最近在做脫氧核糖羥自由基清除實(shí)驗(yàn)，參考的文獻(xiàn)是Okezie I. A. Deoxyribose assay for detecting hydroxyl radicals.Methods in Enzymology, 1994, 233: 57-66. 根據(jù)上面的方法，本人按這樣的順序加入試劑：PBS+FeCl3/EDTA+脫氧核糖+樣品（以Trolox為陽(yáng)性對(duì)照）+H2O2，最后加入VitC引發(fā)反應(yīng)；后面用TBA和TCA顯色。 但是很奇怪的就是，幾乎每次做的結(jié)果都是顏色由淺至深，而合理的結(jié)果應(yīng)該是由深至淺。 還有另外一個(gè)問(wèn)題，這個(gè)實(shí)驗(yàn)要求樣品要溶于水，但是不溶于水的樣品可以做么？我考察過(guò)甲醇、乙醇、DMSO、THF、DMF、丙酮和乙腈作為溶劑，發(fā)現(xiàn)它們都會(huì)使陽(yáng)性對(duì)照組褪至無(wú)色甚至變成其他顏色，請(qǐng)問(wèn)有人遇到這種情況并解決了么？我看很多文獻(xiàn)還有學(xué)位論文都報(bào)道揮發(fā)油做羥自由基清除實(shí)驗(yàn)，都是用甲醇乙醇去溶解，但我覺(jué)得應(yīng)該不可能吧？ 真心求助，謝謝！ |
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