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jinqimaggie鐵蟲 (小有名氣)
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P32 5'標記一定要dephosphorylation嗎，不用會怎樣..謝謝!!
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我用P32 5'端標記miRNA protocol里說要dephosphorylation（加phosphatase），然后再加gamma P32 標記。 但是我標記后在imager里看不到樣品的band怎么辦？ 相應的RNAmarker也是用5‘端標記，沒有經(jīng)過dephosphorylation，可以用磷的imager看到黑帶。 求助。非常感激。 |
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cicelyzh
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4樓2013-03-26 01:38:54
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是，損失很大， 具體過程是這樣的，我想做5’end label ，首先transcript，然后用isolation kit(酚仿)純化，純化后濃度在200ng/微升，感覺應該夠用，然后做dephosphorylation , 用CIP做之后，用酚仿試劑純化，再后用純化后的miRNA與gamma P32, kinase等label, 然后用spin coulumn純化。 這一步純化后因為樓里沒有scintilation counter，所以我直接跑膠（polyacrylamide 15%）。 除去5‘end label，我還做了未經(jīng)dephosphorylation步驟的gamma p32label以及在transcription過程中用alpha p32 標記。 今天在screen上expose了近7個小時，仍然看不到band... 快急死了。。。 謝謝。。 |
5樓2013-03-26 07:34:38
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6樓2013-03-26 12:18:43
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7樓2013-04-03 23:45:07
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8樓2013-04-04 02:34:48
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