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zhangyonghu

木蟲(chóng) (小有名氣)

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[交流] AFLP這樣的結(jié)果是怎么回事

我的DNA是最右邊的6個(gè)，中間是酶切連接，左邊是欲擴(kuò)，現(xiàn)在結(jié)果如圖

這是怎么回事啊？
大神們給看看吧

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1樓 2013-03-25 08:27:26

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zhangyonghu

木蟲(chóng) (小有名氣)

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6樓: Originally posted by liulei198477 at 2013-03-25 23:05:49
預(yù)擴(kuò)產(chǎn)物跑聚丙烯酰胺膠了嗎？不知道你用什么酶組合？酶切和連接看著還可以。我覺(jué)得可能原因有這么幾個(gè)：
1、繼續(xù)稀釋你的連接產(chǎn)物做預(yù)擴(kuò)。
2、循環(huán)數(shù)有問(wèn)題，做個(gè)循環(huán)梯度，在18-25之間。
3、Mg離子做個(gè)梯度。
...

欲擴(kuò)沒(méi)有跑聚丙烯酰胺膠，我的是PstI,MseI組合。
連接產(chǎn)物也需要稀釋么？
我現(xiàn)在是30個(gè)循環(huán)

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7樓2013-03-26 06:45:02

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liugs

禁蟲(chóng) (正式寫手)

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zhangyonghu(金幣+1): 謝謝參與

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2樓2013-03-25 09:54:58

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zhangyonghu

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2樓: Originally posted by liugs at 2013-03-25 09:54:58
感覺(jué)預(yù)擴(kuò)增片段稍大！
電泳是采用什么染色方法？是電泳前加的染色，還是電泳之后染色？

是用的核算染料染的，溶膠的時(shí)候加的，
你覺(jué)得是什么原因?qū)е碌挠麛U(kuò)片段偏大呢，我的酶切連接的結(jié)果怎么樣�。�
謝謝

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4樓2013-03-25 19:44:44

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liulei198477

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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流！ 2013-03-26 04:21:35
1949stone: 回帖置頂 2013-03-26 07:42:00

預(yù)擴(kuò)產(chǎn)物跑聚丙烯酰胺膠了嗎？不知道你用什么酶組合？酶切和連接看著還可以。我覺(jué)得可能原因有這么幾個(gè)：
1、繼續(xù)稀釋你的連接產(chǎn)物做預(yù)擴(kuò)。
2、循環(huán)數(shù)有問(wèn)題，做個(gè)循環(huán)梯度，在18-25之間。
3、Mg離子做個(gè)梯度。
如果還不行，那只能從新做酶切和連接，連接很關(guān)鍵。

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6樓2013-03-25 23:05:49

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