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浪漫的馬新蟲 (初入文壇)
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[求助]
WB做不出來
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| 小蟲做WB已經(jīng)快半年了，但是一直沒做出來，蛋白是從MCF-7和HepG-2提取的，我接的一抗是胰島素受體，出來的條帶始終是模模糊糊的，請高手指點(diǎn)。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
浪漫的馬: 金幣+3 2013-03-28 16:46:00
小丹木木: 金幣+4, 鼓勵(lì)積極交流經(jīng)驗(yàn) 2013-03-29 16:09:24
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浪漫的馬: 金幣+3 2013-03-28 16:46:00
小丹木木: 金幣+4, 鼓勵(lì)積極交流經(jīng)驗(yàn) 2013-03-29 16:09:24
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是條帶不清晰還是條帶非常淺？背景高？ 如果是條帶很明亮但是不清晰，那就是你操作的問題。你可能需要提高WB的操作技術(shù) 特別是電泳和轉(zhuǎn)膜 膠要做好 上樣的時(shí)候也要注意 量要適中 還有轉(zhuǎn)膜的時(shí)候 注意一下轉(zhuǎn)膜的條件 有的時(shí)候是 你的內(nèi)參蛋白很容易轉(zhuǎn)上 但是你的目的蛋白就轉(zhuǎn)不完全 那樣就會(huì)導(dǎo)致條帶很淺 背景深 而如果你的轉(zhuǎn)膜三明治沒有做好 有可能會(huì)轉(zhuǎn)得花掉 條帶扭曲 甚至上不了膜 如果是 你的條帶形狀啊之類的 都不錯(cuò) 但是就特別淺 那有很多種原因的 一方面 會(huì)不會(huì)你的基因本身量很少 那樣當(dāng)然條帶暗 另一方面 你是怎么去裂解細(xì)胞的 是不是裂解液加太多了 你是消化之后收集細(xì)胞到離心管中 再加裂解液的 還是 直接往培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中加裂解液覆蓋整個(gè)底部的？ 如果是后者 蛋白濃度會(huì) 大大降低 內(nèi)參可以出來 但 目的基因未必能出來 還有就是 你一抗會(huì)不會(huì)結(jié)合的不好 二抗又是否正常 你要先排查一下其他的原因 再來 懷疑到一抗 否則 會(huì)很浪費(fèi)錢 |
9樓2013-03-28 00:30:15
2樓2013-03-25 16:51:29
浪漫的馬
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3樓2013-03-25 18:05:39
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4樓2013-03-26 17:02:51
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