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晴空Alex銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
求基因敲除的常用方法
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| 我想做一個關(guān)于藍(lán)藻（原核生物）方面的基因敲除，想?yún)⒄誆.coli的基因敲除方法，求高手指點迷津，另外用什么試劑盒比較好？ |
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cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵應(yīng)助！ 2013-03-28 02:26:34
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| 構(gòu)建載體的方法是差不多的，把抗性基因插在兩個同源臂之間，通過雙交換同源重組取代目的基因。轉(zhuǎn)化的方法有點不同。很多單細(xì)胞藍(lán)藻具備天然感受態(tài)，可以用自然轉(zhuǎn)化的方法。有些不能自然轉(zhuǎn)化的，需要用結(jié)合或者電轉(zhuǎn)化。這些方法文獻(xiàn)里或者網(wǎng)上都可以搜到的。轉(zhuǎn)化子篩選時需要一兩個月。因為在通常的實驗室培養(yǎng)條件下，每個藍(lán)藻細(xì)胞里有十幾個拷貝的基因組DNA，需要劃線等segregation。 |
2樓2013-03-28 01:51:57
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