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肥貓p木蟲 (正式寫手)
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[交流]
大家同源重組時(shí)同源臂位于ORF之外的2端還是之外之內(nèi)都行？ 已有2人參與
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大家通過同源重組敲除基因的時(shí)候，同源臂一般多大（真菌中or原核中），同源臂是位于ORF之外的2側(cè)還是之外之內(nèi)無所謂？ 如果是做基因替換，就不能破壞上游的調(diào)控序列，因此最好的辦法就是正好到起始密碼子處，可是由于酶切位點(diǎn)、引物設(shè)計(jì)等問題，肯定不能這么完美。那么如果在原基因的ORF還殘留幾十個(gè)bp（3 的倍數(shù)），再接上新基因的oRF，可以這么干么？是否會不嚴(yán)謹(jǐn)？謝謝大家。歡迎大家討論。 |
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敲除的話無所謂，一般放在外側(cè)更保險(xiǎn)一些吧，這樣把編碼區(qū)完全置換掉。 如果要嚴(yán)格的“替換”，可以用融合PCR構(gòu)建置換盒，不受酶切位點(diǎn)影響。參見http://www.sciencedirect.com/sci ... i/S1087184504001185 |
3樓2013-03-29 15:56:25
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