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肥貓p木蟲 (正式寫手)
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[交流]
大家同源重組時同源臂位于ORF之外的2端還是之外之內都行？ 已有2人參與
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大家通過同源重組敲除基因的時候，同源臂一般多大（真菌中or原核中），同源臂是位于ORF之外的2側還是之外之內無所謂？ 如果是做基因替換，就不能破壞上游的調控序列，因此最好的辦法就是正好到起始密碼子處，可是由于酶切位點、引物設計等問題，肯定不能這么完美。那么如果在原基因的ORF還殘留幾十個bp（3 的倍數(shù)），再接上新基因的oRF，可以這么干么？是否會不嚴謹？謝謝大家。歡迎大家討論。 |
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cicelyzh
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2樓2013-03-28 23:57:48
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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敲除的話無所謂，一般放在外側更保險一些吧，這樣把編碼區(qū)完全置換掉。 如果要嚴格的“替換”，可以用融合PCR構建置換盒，不受酶切位點影響。參見http://www.sciencedirect.com/sci ... i/S1087184504001185 |
3樓2013-03-29 15:56:25
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