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熊孩子飛銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
青枯菌（或者相似菌）電轉(zhuǎn)問(wèn)題，急！還請(qǐng)大家?guī)蛶兔?
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最近在做一株菌的電轉(zhuǎn)，是與青枯菌（Ralstonia）同屬的菌，想轉(zhuǎn)入GFP質(zhì)粒，進(jìn)行熒光檢測(cè)，可是做了很多次都不成功啊，還請(qǐng)大家了解的幫幫忙，或者做過(guò)相似的陰性菌也說(shuō)幾句話吧~ 我的方法是： OD600=0.4-0.6（大概8-10h）的時(shí)候冰浴30min，6000rpm離心6min，用無(wú)菌水洗3-4次，最后用1mL無(wú)菌水重懸。 每200 uL感受態(tài)分裝到電轉(zhuǎn)杯中，加2-5 uL質(zhì)粒，電轉(zhuǎn)，1.5kV，2.0kV，2.5kV，3.0kV都試過(guò)，之后加LB 80rpm過(guò)夜復(fù)蘇，涂布。 不管怎么樣，還是希望大家交流一下，如果真的有幫助的，我會(huì)加金幣。才來(lái)這里，不知道一般是給多少金幣的。謝謝大家！ |
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跳跳虎201314
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 2.3
- 帖子: 4
- 在線: 2.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 2423135
- 注冊(cè): 2013-04-17
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，鼓勵(lì)應(yīng)助，分子生物版塊期待你的更多精彩。 2013-04-18 08:23:18
熊孩子飛: 金幣+10, ★★★很有幫助, 十分感謝 2013-04-19 04:17:35
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熊孩子飛: 金幣+10, ★★★很有幫助, 十分感謝 2013-04-19 04:17:35
| 一般去10mL培養(yǎng)液，10mL的預(yù)冷無(wú)菌水洗兩遍，最后一遍用10%甘油洗，再用200uL10%甘油,100uL分裝，你試試？復(fù)蘇一般用SOC，怕離子濃度高，就稀釋5倍，復(fù)蘇的話3h就夠了，怎么要過(guò)夜呀？還有就是想問(wèn)你你GFP質(zhì)粒帶那個(gè)抗生素標(biāo)記？有氨芐或者壯觀霉素的嗎？看到后速回，想交流一下！lebora@sina.com |
2樓2013-04-17 22:00:32
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