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1338070201新蟲 (初入文壇)
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[求助]
真核轉(zhuǎn)染表達(dá)，求助
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| 各位大神，我將我的蛋白克隆到一個(gè)帶有puro抗性的真核質(zhì)粒上，想篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)。但是可能是我蛋白帶有核酸內(nèi)切酶活性的緣故，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染在293T細(xì)胞中都不表達(dá)。我想問問有什么解決方法，換質(zhì)粒行嗎？有哪些質(zhì)�？晒┻x擇？ |
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2樓2013-04-01 12:02:20
1338070201
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3樓2013-04-01 15:21:33
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| 你把內(nèi)切酶活性的關(guān)鍵位點(diǎn)突變掉看下是否可以表達(dá)，如果可以，則說明是內(nèi)切酶活性而非載體的原因�？赡茉贀Q載體也沒什么用了。不過你最好還是一些參考內(nèi)切酶表達(dá)的文獻(xiàn)看看吧， |
4樓2013-04-02 15:28:00
5樓2013-04-02 16:42:31
18761615793
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| 想要構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系，這種情況的話，應(yīng)該確定質(zhì)粒有沒有轉(zhuǎn)進(jìn)去，樓上說的對(duì)的，其次在考慮轉(zhuǎn)染效率 |
6樓2015-11-09 17:08:10
18761615793
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| 不同的轉(zhuǎn)染方法，可以參考 細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法比較，如果轉(zhuǎn)進(jìn)去了，在從轉(zhuǎn)染方法上考慮，包括用的轉(zhuǎn)染試劑，細(xì)胞的狀態(tài)很多問題都要考慮啊 |
7樓2015-11-09 17:10:00
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