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意孤城_金蟲 (正式寫手)
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[求助]
想往一個載體中插入Kan抗性基因該怎么做
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想往通過PCR方法向一個載體中插入一個Kan抗性基因（必須插入，因為要改造載體，不能選kan抗性原載體）。請問我PCR過程中除了要包含ATG開始編碼Kan序列外，他的啟動子和終止子序列該怎么尋找。NCBI上查了 沒找到。有沒有知道的 急求 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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9樓2013-04-03 11:39:44
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【答案】應助回帖
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不知你準備從哪個載體上擴增（pET系列中好像有幾個是ka抗性，可以參考）。 一般，原核的表達調控元件比較簡單（啟動子在atg上游100bp以內，終止子在TAG、TAA or TGA下游100bp以內，啟動子一般有表明顯的-10區(qū)(TATAAT）和-35區(qū)結構，你可以自己找一找，而強終止子有明顯的發(fā)夾結構，你可以試著找一找，如果嫌麻煩，可以直接擴增包含編碼區(qū)上下游各100bp的序列，一般就足夠了。 goodluck! |
3樓2013-04-01 22:11:59
gyesang
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4樓2013-04-02 20:31:07
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5樓2013-04-02 20:37:55
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