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cyt198木蟲 (小有名氣)
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[求助]
westernblot發(fā)光液
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| 想問一下westernblot常用的發(fā)光液種類以及它們的優(yōu)缺點和價格，麻煩專業(yè)人員給推薦一下，我最近想選擇一款，謝謝！ |
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在Western Blotting實驗的發(fā)光檢測中，由于發(fā)光增強劑的使用，發(fā)光靈敏度已不是問題，更核心和關(guān)鍵的是，避免發(fā)光試劑造成“非特異條帶”或“背景條帶”、避免“發(fā)光淬滅”，需要發(fā)光更加穩(wěn)定可靠，避免人為干擾。發(fā)光檢測試劑的發(fā)光特異性和發(fā)光穩(wěn)定性已成為實驗成功的關(guān)鍵。 EnlightTM Western特異發(fā)光檢測試劑有如下特點： 1. EnlightTM采用精準的發(fā)光底物，有效降低發(fā)光試劑造成的非特異發(fā)光和背景發(fā)光。 2. EnlightTM含獨特的發(fā)光增強劑，靈敏度高，微弱的信號也能檢測。 3. EnlightTM采用特異的發(fā)光配方，發(fā)光快速而穩(wěn)定。 4. EnlightTM不破壞膜上蛋白，可在曝光后，經(jīng)洗滌，對多種蛋白進行雜交。 1. 常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、HRP標記抗體或核酸探針孵育、洗膜。以下操作在室溫進行。 注意：EnlightTM推薦的抗體稀釋度為: 儲存液濃度為1mg/ml的一抗推薦稀釋度 儲存液濃度為1mg/ml的二抗推薦稀釋度 1:1000-1:5000 或 0.2-1.0μg/ml 1:2000-1:10000或10-50μg/ml 2. 新鮮配制發(fā)光工作液。將BufferA和Buffer B按1:1比率混合，制成發(fā)光工作液(每1cm2膜需要0.125ml發(fā)光工作液)。轉(zhuǎn)移到清潔的塑料小盒中。 3. 用鑷子將漂洗過的膜取出，將膜的下緣與濾紙輕輕接觸以除去膜上多余的洗液，但勿使膜完全干燥。將膜轉(zhuǎn)移至有發(fā)光工作液的塑料小盒中，使其完全浸泡，輕輕搖晃，室溫孵育幾十秒到1分鐘。 4. 用鑷子將膜夾起5-10秒，并將膜的下緣與濾紙輕輕接觸以除去膜上多余的發(fā)光液，迅速將膜完全包裹于潔凈保鮮膜內(nèi)，去除氣泡和褶皺，蛋白面朝上固定于X片暗盒內(nèi)。 5. 在黑暗中一次重疊放入3張X光膠片，30分鐘或更長時間后全部取出顯影。 6. 對同一張膜進行多次蛋白雜交：用PBST或TBST洗滌掉發(fā)光液（10min×3次），然后從開始一抗雜交即可。 四 注意事項 1. 發(fā)光液不宜暴露于強光下時間過久，請避光保存，在暗室操作。 2. 為了得到最佳的曝光效果，優(yōu)化一抗、二抗的稀釋比例。 3. 請選擇高質(zhì)量保鮮膜。 4. 避免使用NaN3回收HRP偶聯(lián)的抗體，因為NaN3能抑制HRP的活性。 英格恩的發(fā)光液最好用 |
5樓2015-09-08 14:11:27
xiangyu9356
至尊木蟲 (小有名氣)
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【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵交流 2013-04-10 16:53:45
cyt198: 金幣+50, ★★★很有幫助 2013-04-11 15:59:51
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cyt198: 金幣+50, ★★★很有幫助 2013-04-11 15:59:51
| 我們實驗室一直在用Millipore發(fā)光液，我也曾經(jīng)和別的發(fā)光液比較過，感覺還是Millipore的稍微好一些，發(fā)光效率和穩(wěn)定性都不錯。就是價格稍貴，500ml裝￥2000+，100ml裝￥650+。 |
2樓2013-04-10 11:31:29
縮++影: 編輯內(nèi)容 2013-11-08 17:40
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
4樓2013-07-02 22:12:25
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