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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 微生物 » 實驗/技術 » 請問TEV酶怎么保存？
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shenwuyan鐵蟲 (初入文壇)
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請問TEV酶怎么保存？
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我表達純化了一批tev酶，純度和濃度都挺高的。 但是洗脫下來的tev酶在500mM咪唑中，用洗脫液稀釋到OD280=2，約有40ml； 為了保存，需去咪唑，用1L如下透析液4°C透析過夜： 50 mM Tris HCl pH=7.5 plus 1 mM EDTA, 5 mM DTT 結果第二天一看，一大坨一大坨的沉淀�。�！  離心后取上清測OD280，僅有0.2左右。 看到別人protocol這么寫： “Do not concentrate TEV protease too much (0.5 - 1 mg/ml) Spin 10,000 rpm for 20 min Take supernatant Add glycerol for storage at -80oC. ” 我用10k的膜濃縮，堵膜，一下午幾乎沒有濃縮多少。 現(xiàn)在就很疑惑，洗脫下來 在高濃度咪唑中的tev酶該怎么處理并保存？越詳細越好 |
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