 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 4464 | 回復(fù): 9 | |||||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 MolEPI ，點擊這里進行查看 | |||||
[交流]
TEV酶的純化出問題了，求解？？、
|
|||||
| 最近要春一批TEV酶用來切HIS標(biāo)簽，PROTOCOL中說的是過NI柱和Q柱純，過的時候發(fā)現(xiàn)蛋白很容易沉（尤其是鹽低的時候）；最后Q柱的峰很難看 跑出電泳來發(fā)現(xiàn)雜帶很多 而且我要的是44KD的蛋白 但在30KD左右卻又一條更明顯的帶。。。。。會不會是只有我要的蛋白沉了？？？ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 核酸生物學(xué)實驗經(jīng)驗 | 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有236人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 蛋白酶分離純化
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 酶的純化問題
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 純化后酶切產(chǎn)物的保存
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 蛋白純化分離問題
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 關(guān)于蛋白純化的問題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【交流】酶分離純化中的脫色問題
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】求教蛋白酶的分離純化中遇到的問題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助】藥典中規(guī)定純化水硝酸鹽的檢測方法出現(xiàn)問題了？？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】求解蛋白質(zhì)分離純化的難題
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 【求助/交流】測序問題：PCR產(chǎn)物未純化測序會怎樣？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 有關(guān)水生生物酶純化的文章有哪些比較快的SCI期刊可以投
已經(jīng)有6人回復(fù)
» 搶金幣啦！回帖就可以得到:
-
青島高校2026招生碩士研究生
+5/760
-
溫柔善良，重慶女孩，找男友……。為什么一個加的人都沒有呀？
+2/412
-
紹興大學(xué)博士教師招聘1位（化學(xué)化工相關(guān)）
+5/285
-
福建師范大學(xué)葉應(yīng)祥課題組招收2026級博士研究生
+2/154
-
材料、化學(xué)類碩士研究生調(diào)劑機會，學(xué)碩專碩均可，有意請聯(lián)系，非誠勿擾！
+1/85
-
西北大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院博士招生（還有兩個名額，3月30日截至）
+1/63
-
PBAT溶解做成乳液
+1/36
-
上海交大招聘高分子方向博士后及科研助理
+1/35
-
南昌一本市政工程接受調(diào)劑
+1/12
-
2026年黃河科技學(xué)院納米功能材料研究所招聘
+2/12
-
武漢工程大學(xué)資源生物技術(shù)課題組生物/環(huán)境/化工碩士、博士研究生招生及調(diào)劑
+2/12
-
計算機(11408)考研361分求調(diào)劑
+1/10
-
福州大學(xué)國家級人才湯育欣教授課題組2026年招收”申請考核制“儲能電池方向博士研究生
+1/6
-
寧波東方理工大學(xué)余鵬課題組2026年上海交大聯(lián)培博士生、博士后、科研助理招聘
+1/6
-
26年申博自薦-計算機視覺
+1/5
-
5han一本強校招收材料專業(yè)碩士
+1/5
-
2026年浙江清華長三角研究院智慧能源中心招聘博士后-電氣方向
+1/5
-
27年博士申請
+1/3
-
香港中文大學(xué)化學(xué)系吳基培教授招募2026年秋季（2026年8月1日）入學(xué)全獎博士研究生
+1/3
-
中科院上海微系統(tǒng)所材料生長理論與仿真課題組-博士后招聘（材料計算與AI4S）
+1/1
ganchao1776
至尊木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 12
- 應(yīng)助: 18 (小學(xué)生)
- 金幣: 11233.1
- 帖子: 3401
- 在線: 900.8小時
- 蟲號: 330935
2樓2011-08-26 10:24:49
3樓2011-08-26 10:44:22
ganchao1776
至尊木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 12
- 應(yīng)助: 18 (小學(xué)生)
- 金幣: 11233.1
- 帖子: 3401
- 在線: 900.8小時
- 蟲號: 330935
4樓2011-08-26 12:09:53
冼亮淀粉酶
專家顧問 (知名作家)
-
專家經(jīng)驗: +248 - MolEPI: 46
- 應(yīng)助: 257 (大學(xué)生)
- 貴賓: 0.272
- 金幣: 19459.9
- 帖子: 6586
- 在線: 2777.7小時
- 蟲號: 856414
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+5, MolEPI+1): 大牛辛苦了！ 2011-08-27 00:59:34
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+5, MolEPI+1): 大牛辛苦了！ 2011-08-27 00:59:34
|
TEV酶現(xiàn)在可以在實驗室自己表達純化和使用，不一定要買試劑試劑公司的，所以你要自己做這個酶，就先查一下這個質(zhì)粒是怎么來的，前面有沒有人純化過這個質(zhì)粒表達的TEV酶，八成是有的，要不然你也拿不到這個質(zhì)粒，問問他們純化的操作和結(jié)果，再與自己的比較，看看是哪個地方出問題。 大腸桿菌表達蛋白質(zhì)如果出現(xiàn)包涵體就很麻煩，這時候要先看看上清液中有沒有你想要的蛋白質(zhì)，如果有，那就別做包涵體復(fù)性，費時費力還效率特低，寧可搖多一些菌取上清液也別做復(fù)性。對于折疊正確的酶來說，在高鹽的時候容易變性（6M以上的尿素可以將肽鏈相互糾纏的包涵體溶解），而在低鹽例如20mM Tris-HCl 時能保持良好的溶解狀態(tài)，例如我的淀粉酶，所以假如你的TEV酶是包涵體用尿素溶解的，那么你就思考一下，看看上清液中存在多少，別碰包涵體了。 假如形成了包涵體，你試一下其它宿主，例如BL21,ROSSETA,Origami（這個是brightfuture01用過，我沒用過）等等，很可能有一個宿主表達出來的就主要處于上清液了，我?guī)啄昵氨磉_過5個纖維素酶基因，都主要在上清液。如果還都是包涵體，那么可能就是表達量多的時候就容易形成包涵體，試一下非表達菌株，例如JM109、EPI100、DH5alpha，可能雖然表達量少，但上清液中有你要的蛋白質(zhì)。 |
5樓2011-08-27 00:22:03
6樓2011-08-27 13:56:42
7樓2011-08-27 13:58:37
8樓2011-08-28 16:18:18
9樓2014-07-24 12:26:21
10樓2015-05-26 10:59:07
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 loveskyzhou 的主題更新
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 328求調(diào)劑，英語六級551，有科研經(jīng)歷 +5 | 生物工程調(diào)劑 2026-03-17 | 9/450 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 0805 316求調(diào)劑 +3 | 大雪深藏 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 【考研調(diào)劑】化學(xué)專業(yè) 281分，一志愿四川大學(xué)，誠心求調(diào)劑 +11 | 吃吃吃才有意義 2026-03-19 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | .m.. 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
[基金申請]
學(xué)校已經(jīng)提交到NSFC，還能修改嗎？
40+4
|
babangida 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +3 | 鳳凰院丁真 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 310求調(diào)劑 +3 | baibai1314 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)319求調(diào)劑 +7 | 錦鯉0909 2026-03-17 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿中國石油大學(xué)（華東） 本科齊魯工業(yè)大學(xué) +3 | 石能偉 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
 271材料工程求調(diào)劑
+8
|
.6lL 2026-03-18 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 南京大學(xué)化學(xué)376求調(diào)劑 +3 | hisfailed 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
材料與化工 322求調(diào)劑
+4
|
然11 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程調(diào)劑 +9 | 大可digkids 2026-03-16 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +5 | pupcoco 2026-03-17 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 材料，紡織，生物（0856、0710），化學(xué)招生啦 +3 | Eember. 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +4 | A_JiXing 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +5 | 上岸的小葡 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿蘇州大學(xué)材料工程（085601）專碩有科研經(jīng)歷三項國獎兩個實用型專利一項省級立項 +6 | 大火山小火山 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿，福州大學(xué)材料專碩339分求調(diào)劑 +3 | 木子momo青爭 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +5 | 大米飯！ 2026-03-15 | 5/250 |
|