 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
小木蟲論壇-學術(shù)科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 酶的純化問題
| 9 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1874 | 回復: 8 | ||||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 MolEPI ，點擊這里進行查看 | ||||
[求助]
酶的純化問題
|
||||
| 在下，目前正在純化一個酸性酶，用離子交換層析去純化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)純化出來的結(jié)果，跑電泳出現(xiàn)了6-7條帶，并且靠得很近，這樣下一步，很難處理，老師想讓我用純化后的蛋白質(zhì)再去讓同一根離子柱，該怎么辦？？各位大俠幫忙一下�。�！ |
回復此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 電泳、bio-rad 電轉(zhuǎn)化儀及操作 | 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有186人回復
-
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 蛋白純化遇到問題
已經(jīng)有22人回復
- 蛋白互作必會，GST純化遇到的問題
已經(jīng)有13人回復
- PCR ， 雙酶切，連接問題
已經(jīng)有17人回復
- TEV酶的純化出問題了，求解？？、
已經(jīng)有9人回復
- 真菌（青霉）純化問題
已經(jīng)有14人回復
- 純化后酶切產(chǎn)物的保存
已經(jīng)有10人回復
- 蛋白純化分離問題
已經(jīng)有19人回復
- 酶純化后的保存問題
已經(jīng)有4人回復
- 關(guān)于蛋白純化的問題
已經(jīng)有7人回復
- 【交流】酶分離純化中的脫色問題
已經(jīng)有11人回復
- 【求助/交流】求教蛋白酶的分離純化中遇到的問題
已經(jīng)有5人回復
- 【求助/交流】純化酶切后的膜蛋白做Western blot沒條帶，why？
已經(jīng)有9人回復
- 【求助/交流】粘性末端連接問題
已經(jīng)有12人回復
江南
金蟲 (正式寫手)
- 應助: 6 (幼兒園)
- 金幣: 1183.5
- 散金: 2589
- 紅花: 2
- 帖子: 329
- 在線: 120.2小時
- 蟲號: 207159
- 注冊: 2006-03-04
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學
2樓2011-11-05 00:40:01
3樓2011-11-05 12:10:01
冼亮淀粉酶
專家顧問 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
專家經(jīng)驗: +248 - MolEPI: 46
- 應助: 257 (大學生)
- 貴賓: 0.272
- 金幣: 19455.4
- 散金: 1704
- 紅花: 121
- 帖子: 6586
- 在線: 2777.2小時
- 蟲號: 856414
- 注冊: 2009-09-25
- 性別: GG
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學
- 管轄: 微生物
4樓2011-11-05 22:56:04
5樓2011-11-06 23:55:51
江南
金蟲 (正式寫手)
- 應助: 6 (幼兒園)
- 金幣: 1183.5
- 散金: 2589
- 紅花: 2
- 帖子: 329
- 在線: 120.2小時
- 蟲號: 207159
- 注冊: 2006-03-04
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學
6樓2011-11-09 10:24:02
冼亮淀粉酶
專家顧問 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
專家經(jīng)驗: +248 - MolEPI: 46
- 應助: 257 (大學生)
- 貴賓: 0.272
- 金幣: 19455.4
- 散金: 1704
- 紅花: 121
- 帖子: 6586
- 在線: 2777.2小時
- 蟲號: 856414
- 注冊: 2009-09-25
- 性別: GG
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學
- 管轄: 微生物
【答案】應助回帖
mengfei8336(MolEPI+1): 2011-11-09 20:11:17
BIO-che(金幣+1): 98分 是個高手 可以看出來 很喜歡你 2011-11-13 00:09:21
BIO-che(金幣+1): 98分 是個高手 可以看出來 很喜歡你 2011-11-13 00:09:21
|
剛看了樓主的站內(nèi)短信，特回復如下： 1、關(guān)于淀粉酶有多少個亞基的問題，就目前文獻報道，我印象中沒有看到為多亞基四級結(jié)構(gòu)的alpha-淀粉酶和糖化酶，其它淀粉酶是否為僅有三級結(jié)構(gòu)我就不知道了。 2、樓主用陰離子交換層析，pH5.0的緩沖系統(tǒng)，陰離子交換層析要求使用的pH系統(tǒng)起碼比目的蛋白質(zhì)高1個pH值單位，也就是說此時淀粉酶的等電點小于或者等于4。就未知的淀粉酶來說，在不純的情況下等電點確定起來存在誤差，而小于4的淀粉酶比較少見，我懷疑可能目的蛋白質(zhì)的等電點高于4.0，pH5.0的體系不一定合適，如果真的如此，則會造成洗脫行為不穩(wěn)定。加上醋酸-醋酸鈉緩沖液不是很穩(wěn)定的緩沖體系，緩沖區(qū)間很窄。如果可以，建議使用6.0，換用其它緩沖體系。 3、關(guān)于分子篩，G75的分離范圍適用于不超過100KD的蛋白質(zhì)，要求目的蛋白質(zhì)與雜質(zhì)蛋白質(zhì)分子量為2倍關(guān)系，或者相差更大。加上分子篩也不是能將兩個蛋白質(zhì)完全分開的，一個蛋白質(zhì)的持續(xù)出峰時間會較長，造成相互污染。由于你的蛋白質(zhì)雜帶較多，所以我對分離效果不持樂觀態(tài)度。 4、除了改變體系的pH值之外，還有更好的可能值得嘗試，用疏水層析柱。換一種分離原理可能會提高分離效果。假如你們沒有純化儀，那就買空柱和填料自己裝一根，不會很貴的。買的時候注意買使用范圍廣的苯基Phenyl。僅用強陰離子交換層析和凝膠過濾就能使蛋白質(zhì)純化，我認為需要很大的運氣。 5、純化之后要跑SDS-PAGE才能判斷，下次要上圖。 |
7樓2011-11-09 20:04:22
8樓2011-11-09 21:15:48
dasheng1980
鐵桿木蟲 (知名作家)
大圣
- 應助: 64 (初中生)
- 金幣: 7702.4
- 紅花: 3
- 沙發(fā): 7
- 帖子: 8882
- 在線: 412.8小時
- 蟲號: 1363851
- 注冊: 2011-08-09
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
9樓2011-11-11 19:40:01
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 BIO-che 的主題更新
| 9 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0703化學調(diào)劑，求各位老師收留 +9 | 秋有木北 2026-03-14 | 9/450 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 【同濟軟件】軟件（085405）考研求調(diào)劑 +3 | 2026eternal 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
[考研] 085601專碩，總分342求調(diào)劑，地區(qū)不限 +5 | share_joy 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +5 | △小透明* 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +4 | 睿08 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703化學調(diào)劑 +3 | 妮妮ninicgb 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑 +6 | 為學666 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩調(diào)劑 +5 | 204818@lcx 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[碩博家園] 湖北工業(yè)大學 生命科學與健康學院-課題組招收2026級食品/生物方向碩士 +3 | 1喜春8 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[論文投稿] 有沒有大佬發(fā)小論文能帶我個二作 +3 | 增銳漏人 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿，福州大學材料專碩339分求調(diào)劑 +3 | 木子momo青爭 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 機械專碩325，尋找調(diào)劑院校 +3 | y9999 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[基金申請]
今年的國基金是打分制嗎？
 50+3
|
zhanghaozhu 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +3 | Yanyali 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600調(diào)劑 +5 | 漾漾123sun 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 學碩285求調(diào)劑 +13 | Wisjxn 2026-03-12 | 46/2300 |
|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑 +3 | ?醬給調(diào)劑跪了 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0856材料與化工301求調(diào)劑 +5 | 奕束光 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +8 | 困于星晨 2026-03-12 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿211化學學碩310分求調(diào)劑 +8 | 努力奮斗112 2026-03-12 | 9/450 |
|