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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 質粒酶切
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bunntly木蟲 (正式寫手)
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[求助]
質粒酶切
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本人看到一篇文獻有些不清楚啊 請大家指教。 1、“構建一攜帶有假定的ccpAx起始密碼子的ccpAx::egfp融合基因質粒，ccpAx基因用木醋桿菌ATCC23769基因組作為模板進行PCR擴增，SP(orf21)和AP2(orf2)作為引物。擴增后的ccpAx產(chǎn)物用SacI和BglII酶切處理，而后連接到用SacI和BamHI酶切處理后的質粒pTIE上產(chǎn)生質粒pT121E質粒。” 擴增后的產(chǎn)物和質粒為什么用不同的酶切啊，不應該用相同的酶切而后才能連上嗎？ 2、“擴增后的CcpAx基因片段用KpnI和BamHI酶切處理后連接到用相同限制性酶切處理的pUC19質粒生成質粒pUC19-CcpAx。用NdeI和BamHI酶切處理質粒pUC19-CcpAx獲得CcpAx基因�！� 后面一步酶切CcpAx時為什么不用KpnI和BamHI酶而用的是NdeI和BamHI酶呢？ |
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cicelyzh
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