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bunntly木蟲 (正式寫手)
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[求助]
質(zhì)粒酶切
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本人看到一篇文獻有些不清楚啊 請大家指教。 1、“構(gòu)建一攜帶有假定的ccpAx起始密碼子的ccpAx::egfp融合基因質(zhì)粒，ccpAx基因用木醋桿菌ATCC23769基因組作為模板進行PCR擴增，SP(orf21)和AP2(orf2)作為引物。擴增后的ccpAx產(chǎn)物用SacI和BglII酶切處理，而后連接到用SacI和BamHI酶切處理后的質(zhì)粒pTIE上產(chǎn)生質(zhì)粒pT121E質(zhì)粒�！� 擴增后的產(chǎn)物和質(zhì)粒為什么用不同的酶切啊，不應該用相同的酶切而后才能連上嗎？ 2、“擴增后的CcpAx基因片段用KpnI和BamHI酶切處理后連接到用相同限制性酶切處理的pUC19質(zhì)粒生成質(zhì)粒pUC19-CcpAx。用NdeI和BamHI酶切處理質(zhì)粒pUC19-CcpAx獲得CcpAx基因�！� 后面一步酶切CcpAx時為什么不用KpnI和BamHI酶而用的是NdeI和BamHI酶呢？ |
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cicelyzh
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4樓2013-04-14 00:40:18
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3樓2013-04-13 12:29:17
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